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它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
50T流感病毒H6亞型PCR檢測(cè)試劑盒 |
50T |
BH-P63228 |
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
異鎖鏈素(IDES)ELISA試劑盒 IDES ELISA Kit 磷酸化β抑制蛋白1抗體英文名稱:Phospho-beta-Arrestin 1 (Ser412) 0.1ml
異檸檬酸脫氫酶(ICD)ELISA試劑盒 ICD ELISA Kit 磷酸化有絲分裂激酶A抗體英文名稱:Phospho-Aurora A (Thr288) 0.1ml
異常凝血酶原(APT)ELISA試劑盒 APT ELISA Kit 磷酸化APS抗體英文名稱:phospho-APS(Ser598) 0.1ml
異丙腎上腺素(iso-Hyd)ELISA試劑盒 iso-Hyd ELISA Kit 有絲分裂激酶A抗體英文名稱:Aurora A 0.1ml
乙酰乙酸(ACAC)ELISA試劑盒 ACAC ELISA Kit 干擾素誘導(dǎo)蛋白AIM2抗體英文名稱:AIM2 0.1ml
乙酰肝素酶(HPA)ELISA試劑盒 HPA ELISA Kit 水通道蛋白-2抗體英文名稱:Aquaporine 2 0.1ml
乙酰輔酶A羧化酶合成酶(ACC)ELISA試劑盒 ACC ELISA Kit 抑制基因ABI2/精氨酸酪氨酸蛋白激酶結(jié)合蛋白抗體英文名稱:ABI2 0.1ml
乙酰膽堿酯酶(AChE)ELISA試劑盒 AChE ELISA Kit ADP核糖基化因子樣11抗體英文名稱:ARL11 0.2ml
乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒 AChRab ELISA Kit ARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX3抗體英文名稱:ARMCX3 0.2ml
乙酰膽堿(ACH)ELISA試劑盒 ACH ELISA Kit ARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX1抗體英文名稱:ARMCX1 0.2ml
乙醛脫氫酶18家族成員A1(ALDH18A1)ELISA試劑盒 ALDH18A1 ELISA Kit ARM重復(fù)X連鎖蛋白ARMCX2抗體英文名稱:ARMCX2 0.2ml
乙醛脫氫酶(ALDH)ELISA試劑盒 ALDH ELISA Kit 自噬相關(guān)蛋白10抗體英文名稱:Apg10 0.2ml
乙肝表面抗原大蛋白(HBV-LP)ELISA試劑盒 HBV-LP ELISA Kit ?;o酶A結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體英文名稱:ACBD6 0.2ml
乙胺碘呋酮(AD)ELISA試劑盒 AD ELISA Kit 脂肪甘油三酯脂酶抗體英文名稱:Adipose Triglyceride Lipase 0.1ml
乙醇脫氫酶(ADH)ELISA試劑盒 ADH ELISA Kit 氨基酰化酶1抗體英文名稱:Aminoacylase 1 0.2ml
50T流感病毒H6亞型PCR檢測(cè)試劑盒華蟾酥毒基 Cinobufagin 470-37-1 20mg
華蟾毒它靈 Cinobufotalin 1108-68-5 10mg
日蟾毒它靈 Gamabufalin 471-95-4 10mg
沙蟾毒精 Bufarenogin 464-74-4 20mg
酯蟾毒配基 Resibufogenin 465-39-4 20mg
常春藤皂苷元 Hederagenin 465-99-6 20mg
α-常春藤皂苷 A-Hederin 27013-91-8 20mg
蟲草素 Cordycepin 73-03-0 20mg
腺苷 Adenosine 58-61-7 20mg
重樓皂苷I Chonglou Saponin I 50773-41-6 20mg
重樓皂苷II Chonglou Saponin II 76296-72-5 20mg
薯蕷皂苷 Dioscin 19057-60-4 20mg
重樓皂苷Ⅵ Polyphyllin VI 55916-51-3 20mg