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它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
50T副溶血弧菌TRH基因PCR檢測試劑盒 |
50T |
BH-P63452 |
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)ELISA試劑盒 IDUA ELISA Kit 結(jié)蛋白樣蛋白CGNL1抗體英文名稱:CGNL1 0.1ml
α2纖溶酶抑制物(α2-PI)ELISA試劑盒 α2-PI ELISA Kit 細(xì)胞生長調(diào)節(jié)蛋白CGREF1抗體英文名稱:CGREF1 0.1ml
α2抗纖溶酶(α2-AP)ELISA試劑盒 α2-AP ELISA Kit 富含亮氨酸軟骨蛋白抗體英文名稱:CHAD 0.1ml
α2巨球蛋白(α2-MG)ELISA試劑盒 α2-MG ELISA Kit 軟骨蛋白樣蛋白抗體英文名稱:CHADL 0.1ml
α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP)ELISA試劑盒 AMBP ELISA Kit 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD3抗體英文名稱:CHCHD3 0.1ml
α1微球蛋白(α1-MG)ELISA試劑盒 α1-MG ELISA Kit 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD10抗體英文名稱:CHCHD10 0.1ml
α1微球蛋白(MGα1)ELISA試劑盒 MGα1 ELISA Kit 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD7抗體英文名稱:CHCHD7 0.1ml
α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA試劑盒 α1-AGP ELISA Kit ATP依賴的解旋酶CHD1抗體英文名稱:CHD1 0.1ml
α1抗胰糜蛋白酶(AACT)ELISA試劑盒 AACT ELISA Kit 染色質(zhì)解旋酶DNA結(jié)合蛋白抗體英文名稱:CHD1L 0.1ml
α1抗胰蛋白酶(α1-AT)ELISA試劑盒 α1-AT ELISA Kit 染色質(zhì)解旋酶DNA結(jié)合蛋白2抗體英文名稱:CHD2 0.1ml
α1防御素(DEFA1)ELISA試劑盒 DEFA1 ELISA Kit 染色質(zhì)解旋酶DNA結(jié)合蛋白3抗體英文名稱:CHD3 0.1ml
α1β糖蛋白(α1β-GP)ELISA試劑盒 α1β-GP ELISA Kit 染色質(zhì)解旋酶DNA結(jié)合蛋白Mi2β抗體英文名稱:CHD4 0.1ml
α/β干擾素受體(IFN-α/βR)ELISA試劑盒 IFN-α/βR ELISA Kit ATP依賴的解旋酶CHD6抗體英文名稱:CHD6 0.1ml
XC趨化因子受體1(XCR1)ELISA試劑盒 XCR1 ELISA Kit ATP依賴的解旋酶CHD8抗體英文名稱:CHD8 0.1ml
Z-DNA結(jié)合蛋白1(ZBP1)ELISA試劑盒 ZBP1 ELISA Kit ATP依賴的解旋酶CHD7抗體英文名稱:CHD7 0.1ml
50T副溶血弧菌TRH基因PCR檢測試劑盒0次 Southern Marker Oligo(生物素)
20次 Southern Marker Oligo(DIG)
50ug 大片段DNA分子量標(biāo)準(zhǔn) Large DNAMETER 4℃保存數(shù)周(長期請存放-20℃)
50次 脈沖電泳Marker(酵母染色體PFG)
50次 脈沖電泳Marker(Lambda LadderPFG)
50次 脈沖電泳Marker(低范圍PFG)
100uL 超螺旋DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)
30次 miRNA電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) miRNA Marker -20℃保存
0.1mL 微量RNA助沉劑 RNADOWN -20℃保存
0.1mL 微量DNA助沉劑 DNADOWN -20℃保存
1mL DNA級Acryl助沉劑 Acryl DNADOWN 4℃保存
1g 彩色Acryl助沉劑 Color Acryl DNADOWN 4℃保存
1g 分子生物學(xué)級糖原干粉 Glycogen Powder 常溫