咨詢電話:18117197628
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
50T小腸結(jié)腸炎耶爾森菌PCR檢測(cè)試劑盒 |
50T |
BH-P63462 |
它具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針?lè)晒舛?RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見(jiàn)下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
ICOS配體(ICOSLG)ELISA試劑盒 ICOSLG ELISA Kit 磷酸化CREB-1抗體英文名稱:phospho-CREB-1(Ser142) 0.1ml
ICE蛋白酶激活因子(IRAP)ELISA試劑盒 IRAP ELISA Kit 磷酸化CREB-1抗體英文名稱:phospho-CREB-1(Ser121) 0.1ml
I 型膠原蛋白(COL I)ELISA試劑盒 COL I ELISA Kit 磷酸化周期素依賴性激酶6抗體英文名稱:phospho-CDK6 (Tyr24) 0.1ml
H-鈣粘著蛋白/H-鈣粘連蛋白(H-Cad/CDH13)ELISA試劑盒 H-Cad/CDH13 ELISA Kit 原癌基因CBL2抗體英文名稱:CBL2 0.2ml
G蛋白偶聯(lián)受體152(GPR152/PGR5)ELISA試劑盒 GPR152/PGR5 ELISA Kit 磷酸化原癌基因CBL2抗體英文名稱:phospho-CBL2 (Tyr674) 0.1ml
G蛋白偶聯(lián)受體109A(GPR109A)ELISA試劑盒 GPR109A ELISA Kit β鏈接素相互作用蛋白1抗體英文名稱:CTNNBIP1 0.1ml
G蛋白偶聯(lián)膽汁酸受體1(GPBAR1)ELISA試劑盒 GPBAR1 ELISA Kit 磷酸化β鏈接素相互作用蛋白1抗體英文名稱:phospho-CTNNBIP1 (Thr43+Ser50) 0.1ml
G蛋白偶聯(lián)雌受體1(GPR30)ELISA試劑盒 GPR30 ELISA Kit 磷酸化β 連環(huán)素蛋白抗體英文名稱:phospho-Beta catenin (Tyr86) 0.1ml
G蛋白偶合受體44(GPR44/CRTH2/DL1R)ELISA試劑盒 GPR44/CRTH2/DL1R ELISA Kit 葉綠體蛋白酶抗體(植物)英文名稱:Chloroplast protease 1ml
GTP酶活化蛋白(GAP)ELISA試劑盒 GAP ELISA Kit 磷酸化后期促進(jìn)復(fù)合蛋白3抗體英文名稱:phospho-CDC27 (Ser427) 0.1ml
GTP酶NRas(NRAS)ELISA試劑盒 NRAS ELISA Kit 磷酸化絲切蛋白抗體英文名稱:Phospho-Cofilin (Tyr140) 0.1ml
Gremlin-1蛋白(GREM1)ELISA試劑盒 GREM1 ELISA Kit 磷酸化絲切蛋白抗體英文名稱:phospho-CFL1 (Tyr89) 0.1ml
GDP解離抑制因子2(GdI2)ELISA試劑盒 GdI2 ELISA Kit 磷酸化細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)激酶2抗體英文名稱:Phospho-CHK2 (ser33) 0.1ml
F-肌動(dòng)蛋白(F-actin)ELISA試劑盒 F-actin ELISA Kit 磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25抗體英文名稱:Phospho-cdc25A (Ser293) 0.1ml
G1/S特異性細(xì)胞周期蛋白E1(CCNE1)ELISA試劑盒 CCNE1 ELISA Kit 磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25抗體英文名稱:Phospho-cdc25A (Ser178) 0.1ml
50T小腸結(jié)腸炎耶爾森菌PCR檢測(cè)試劑盒50g 酪蛋白 Casein 室溫
50g 脫脂奶粉(雜交專用) Nonfat Milk Powder 室溫
50mL 即用型封堵液(NC專用) Southern Blocking Buffer (NC) -20℃保存
50mL 即用型封堵液(Nylon專用) Southern Blocking Buffer (Nylon) -20℃保存
1張 硝酸纖維素膜,13×20 cm(Tiandz) Nitrocellulose Membrane 常溫
1張 硝酸纖維素膜,13×20 cm(Amersham) Nitrocellulose Membrane 常溫
1張 尼龍膜,13×20 cm Nylon Membrane 常溫
5次 天凈沙非同位素探針雜交試劑盒(適用常規(guī)DNA/RNA探針) Nonradioactive Probe Hybridization Kit 雜交液-20℃保存,其余成分常溫
5次 天凈沙非同位素探針雜交試劑盒(適用Oligo探針) Nonradioactive Probe Hybridization Kit 雜交液-20℃保存,其余成分常溫
5次 BCIP-NBT法辛雜交檢測(cè)試劑盒 BCIP-NBT DIG Detection Kit 10×封堵液和BCIP-NBT濃縮液需要-20℃保存,AP標(biāo)記的抗DIG抗體需要4℃保存
5次 DAB法辛雜交試劑盒
5次 TMB法辛雜交試劑盒
5次 DAB法生物素雜交試劑盒
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。