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它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計,不會跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
50T塞內(nèi)卡病毒PCR檢測試劑盒 |
50T |
BH-P63698 |
實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
注意事項:
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
妊娠特異性β1-糖蛋白(PSG1)ELISA試劑盒 PSG1 ELISA Kit Fas活化激酶結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體英文名稱:FASTKD2 0.2ml
妊娠關(guān)聯(lián)血漿蛋白A(PAPPA)ELISA試劑盒 PAPPA ELISA Kit Fas活化激酶結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體英文名稱:FASTKD1 0.2ml
妊娠帶蛋白(PZP)ELISA試劑盒 PZP ELISA Kit F-box蛋白21抗體英文名稱:FBXO21 0.2ml
17-β-羥基類固醇脫氫酶14(HSD17β14)ELISA試劑盒 HSD17β14 ELISA Kit GATA結(jié)合蛋白1伴侶蛋白抗體英文名稱:FOG1 0.2ml
熱休克轉(zhuǎn)錄因子4(HSF4)ELISA試劑盒 HSF4 ELISA Kit 胎球蛋白B/Fetuin β抗體英文名稱:Fetuin beta 0.2ml
熱休克轉(zhuǎn)錄因子2(HSF2)ELISA試劑盒 HSF2 ELISA Kit 叉頭蛋白O1抗體英文名稱:FOXO1A 0.2ml
熱休克轉(zhuǎn)錄因子1(HSF1)ELISA試劑盒 HSF1 ELISA Kit 鐵蛋白重鏈抗體英文名稱:Ferritin Heavy Chain 0.2ml
熱休克蛋白β8(HSPβ8)ELISA試劑盒 HSPβ8 ELISA Kit 類固醇受體復(fù)合物蛋白FKBP5抗體英文名稱:FKBP51 0.2ml
熱休克蛋白β6(HSPβ6)ELISA試劑盒 HSPβ6 ELISA Kit 纖維性鞘結(jié)合蛋白1抗體英文名稱:FSIP1 0.2ml
熱休克蛋白β2(HSPβ2)ELISA試劑盒 HSPβ2 ELISA Kit 纖維細(xì)胞生長因子結(jié)合蛋白2抗體英文名稱:FGFBP2 0.2ml
熱休克蛋白90(HSP90)ELISA試劑盒 HSP90 ELISA Kit 肌動蛋白結(jié)合蛋白Fascin3抗體英文名稱:Fascin-3 0.1ml
熱休克蛋白47(HSP47)ELISA試劑盒 HSP47 ELISA Kit 結(jié)構(gòu)特異性核酸酶FEN1抗體英文名稱:FEN1 0.2ml
熱休克蛋白40(HSP40)ELISA試劑盒 HSP40 ELISA Kit FAM61B蛋白抗體英文名稱:FAM61B 0.2ml
染色框同源物3(CBX3)ELISA試劑盒 CBX3 ELISA Kit 上皮型FAM3C蛋白抗體英文名稱:FAM3C 0.2ml
染色質(zhì)域解旋酶DNA結(jié)合蛋白3(CHD3)ELISA試劑盒 CHD3 ELISA Kit FAM63A蛋白抗體英文名稱:FAM63A 0.2ml
50T塞內(nèi)卡病毒PCR檢測試劑盒10g 咪唑 Imidazole 室溫干燥保存
10g 吲哚 Indole 室溫保存
5g 肌苷 Inosine,F(xiàn)ree Base 室溫干燥保存
100g 肌醇 Inositol 室溫干燥保存
25mg 牛胰島素 Insulin From Bovine Pancreas -20℃保存
250mg 硝基四唑紫嘌呤 INT(Iodonitrotetrazolium Chloride) 4℃避光保存
5g 代乙酰胺 Iodoacetamide 4℃保存
5g 乙酸 Iodoacetic Acid -20℃保存
1g 異丙基 -β-D- 硫代半乳糖苷 IPTG 4℃避光保存
25g L- 異亮氨酸 L-Isoleucine 室溫干燥保存
1g 健那綠 B Janus Green B 室溫保存
1g 硫酸卡那霉素 Kanamycin Sulfate 室溫保存
5g α- 酮戊二酸 α-Ketoglutaric Acid 4℃保存