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它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
50T禽白血病病毒PCR檢測試劑盒 |
50T |
BH-P63716 |
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
輕肽鐵蛋白(FTL)ELISA試劑盒 FTL ELISA Kit 核仁纖維蛋白抗體英文名稱:Fibrillarin 0.2ml
輕肽神經(jīng)絲蛋白(NEFL)ELISA試劑盒 NEFL ELISA Kit 鐵蛋白輕鏈抗體英文名稱:Ferritin Light Chain 0.1ml
親尾蛋白(AFTPH)ELISA試劑盒 AFTPH ELISA Kit 肝細(xì)胞核因子3抗體英文名稱:FOXA2 0.1ml
親環(huán)素D(CYPD)ELISA試劑盒 CYPD ELISA Kit 果糖1,6-二磷酸酯酶抗體英文名稱:FBP1 0.2ml
親環(huán)素B(CYPB)ELISA試劑盒 CYPB ELISA Kit 6磷酸果糖激酶抗體英文名稱:Fructose 6 Phosphate Kinase 0.1ml
親環(huán)素A(CYPA)ELISA試劑盒 CYPA ELISA Kit 肌肉果糖二磷酸酶抗體英文名稱:FBP2 0.1ml
親核素β(KPNβ)ELISA試劑盒 KPNβ ELISA Kit 纖維蛋白原γ鏈抗體英文名稱:Fibrinogen gamma chain 0.2ml
親核素α7(KPNα7)ELISA試劑盒 KPNα7 ELISA Kit 纖維蛋白肽B抗體(血纖肽B)英文名稱:Fibrinopeptide B 0.2ml
親核素α6(KPNα6)ELISA試劑盒 KPNα6 ELISA Kit 原癌基因c FGR抗體英文名稱:FGR 0.2ml
親核素α5(KPNα5)ELISA試劑盒 KPNα5 ELISA Kit 肢體畸形相關(guān)蛋白FHOD1抗體英文名稱:FHOD1 0.2ml
親核素α4(KPNα4)ELISA試劑盒 KPNα4 ELISA Kit 磷酸化肢體畸形相關(guān)蛋白FHOD1抗體英文名稱:phospho-FHOD1 (Thr1141) 0.1ml
親核素α3(KPNα3)ELISA試劑盒 KPNα3 ELISA Kit 纖連蛋白2抗體英文名稱:Fibulin 2 0.2ml
親核素α2(KPNα2)ELISA試劑盒 KPNα2 ELISA Kit 纖連蛋白7抗體英文名稱:Fibulin 7 0.2ml
鞘磷脂脂質(zhì)蛋白1(PLP1)ELISA試劑盒 PLP1 ELISA Kit 范可尼綜合征相關(guān)蛋白FAN1抗體英文名稱:FAN1 0.2ml
親核素α1(KPNα1)ELISA試劑盒 KPNα1 ELISA Kit 彈性蛋白結(jié)合蛋白Fcn2抗體英文名稱:Ficolin 2 0.2ml
50T禽白血病病毒PCR檢測試劑盒5g 甲基橙 Methyl Orange 室溫干燥保存
5g 甲基紅 Methyl Red 室溫陰涼干燥保存
10g 4- 甲基傘形酮 4-Methylumbelliferone 室溫避光保存
25g 甲基 α-D- 吡喃甘露糖苷 Methylα-D-Mannopyarnoside 室溫干燥保存
100mg 4- 甲基傘形酮 -β-D- 葡糖苷酸 4-MUG 4℃避光保存
100mg 肌球蛋白 Myoglobin -20℃保存
25mL 四甲基乙二胺 N,N,N',N'-Tetramethylethylenediamine(TEMED) 4℃避光保存
25g 甲叉雙丙烯酰胺 N,N’-Methylene Bisacrylamide(BIS) 室溫干燥保存
5g α -萘乙酸 NAA (α-Naphthalene Acetic Acid) 室溫保存
1g β -萘乙酸 NAA (β-Naphthalene Acetic Acid) 室溫保存
5g 萘啶酮酸 Nalidixic Acid 室溫干燥保存
25mg 萘酚 AS-TR 磷酸鹽 Naphthol AS-TR Phosphate Disodium Salt -20℃保存
5g 氨基黑 10B Naphthol Blue Black 室溫保存