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服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
50T豬附紅細(xì)胞體(SEP)PCR檢測試劑盒 |
50T |
BH-P63874 |
它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計,不會跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
胞漿-5',3'-核苷酸酶(NT5C)ELISA試劑盒 NT5C ELISA Kit 白介素16抗體英文名稱:IL-16 0.1ml
胞苷脫氨酶(CDA)ELISA試劑盒 CDA ELISA Kit 抑制素βB/Inhibin β B抗體英文名稱:Inhibin beta B 0.1ml
伴肌動蛋白(NEB)ELISA試劑盒 NEB ELISA Kit 白介素11抗體英文名稱:IL-11 0.1ml
伴刀豆球蛋白A(ConA)ELISA試劑盒 ConA ELISA Kit 白介素22受體抗體英文名稱:IL-22R 0.1ml
半椎蛋白2(HMCN2)ELISA試劑盒 HMCN2 ELISA Kit 白介素26抗體英文名稱:IL-26/AK155 0.2ml
半椎蛋白1(HMCN1)ELISA試劑盒 HMCN1 ELISA Kit 白介素-17D抗體英文名稱:IL-17D/IL-27 0.1ml
半乳糖神經(jīng)酰胺酶(GALC)ELISA試劑盒 GALC ELISA Kit 環(huán)指蛋白217抗體英文名稱:IBRDC1 0.2ml
半乳糖凝集素9C(GAL9C)ELISA試劑盒 GAL9C ELISA Kit 白介素2抗體(人)英文名稱:IL-2 0.1ml
半乳糖凝集素9B(GAL9B)ELISA試劑盒 GAL9B ELISA Kit 白介素-23受體抗體英文名稱:IL-23R 0.1ml
半乳糖凝集素9(GAL9)ELISA試劑盒 GAL9 ELISA Kit 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3抗體英文名稱:IGFBP3 0.1ml
半乳糖凝集素7B(GAL7B)ELISA試劑盒 GAL7B ELISA Kit 白細(xì)胞介素6受體β抗體IL-6Rβ英文名稱:IL-6R Beta/CD130/gp130 0.1ml
半乳糖凝集素7(GAL7)ELISA試劑盒 GAL7 ELISA Kit 干擾素-gamma受體1抗體英文名稱:IFNGR1 0.1ml
半乳糖激酶2(GALK2)ELISA試劑盒 GALK2 ELISA Kit 白介素1α前肽/IL-1α前肽抗體英文名稱:IL-1 Alpha Propeptide 0.1ml
半乳糖苷酶β(GLβ)ELISA試劑盒 GLβ ELISA Kit 胰島素生長因子樣家族成員2抗體英文名稱:IGFL2 0.2ml
半乳糖激酶1(GALK1)ELISA試劑盒 GALK1 ELISA Kit 整合素α11抗體英文名稱:ITGA11 0.1ml
50T豬附紅細(xì)胞體(SEP)PCR檢測試劑盒2 ug pNEBRX1-hygro pNEBRX1-hygro 低溫運輸,-20℃保存
2 ug pNFAT-TA-Luc pNFAT-TA-Luc 低溫運輸,-20℃保存
2 ug pNF-κB-Luc pNF-κB-Luc 低溫運輸,-20℃保存
2 ug pNG_v2 pNG_v2 低溫運輸,-20℃保存
2 ug pNI_v2 pNI_v2 低溫運輸,-20℃保存
2 ug pNN_v2 pNN_v2 低溫運輸,-20℃保存
2 ug pNrl-Cre pNrl-Cre 低溫運輸,-20℃保存
2 ug pNTAP- A pNTAP- A 低溫運輸,-20℃保存
2 ug pAP1(PMA)-TA-Luc pAP1(PMA)-TA-Luc 低溫運輸,-20℃保存
2 ug pNTAP- B pNTAP- B 低溫運輸,-20℃保存
2 ug pNTAP- C pNTAP- C 低溫運輸,-20℃保存
2 ug pNTAP-Mef2a pNTAP-Mef2a 低溫運輸,-20℃保存
2 ug pNZ8048 pNZ8048 低溫運輸,-20℃保存
注意事項:
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。