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它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計,不會跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
50T兔黏液瘤病毒(RMV)PCR檢測試劑盒 |
50T |
BH-P63916 |
實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
注意事項:
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
Juxtanodin蛋白(JN)ELISA試劑盒 JN ELISA Kit Kelch樣蛋白23抗體英文名稱:KLHL23 0.2ml
Janus激酶3(JAK3)ELISA試劑盒 JAK3 ELISA Kit BTB-kelch蛋白家族10抗體英文名稱:KBTBD10 0.2ml
Janus激酶2(JAK2)ELISA試劑盒 JAK2 ELISA Kit BTB-kelch蛋白家族4抗體英文名稱:KBTBD4 0.2ml
Janus激酶1(JAK1)ELISA試劑盒 JAK1 ELISA Kit Kelch樣蛋白24抗體英文名稱:KLHL24 0.2ml
Jagged2蛋白(JAG2)ELISA試劑盒 JAG2 ELISA Kit Kelch樣蛋白21抗體英文名稱:KLHL21 0.2ml
Jagged1蛋白(JAG1)ELISA試劑盒 JAG1 ELISA Kit Kelch樣蛋白25抗體英文名稱:KLHL25 0.2ml
Isthmin2蛋白(ISM2)ELISA試劑盒 ISM2 ELISA Kit 驅(qū)動蛋白KNS1抗體英文名稱:Kinesin 0.2ml
Isthmin1蛋白(ISM1)ELISA試劑盒 ISM1 ELISA Kit 驅(qū)動蛋白家族成員1B抗體英文名稱:KIF1B 0.2ml
ISLLIM同源框蛋白1(ISL1)ELISA試劑盒 ISL1 ELISA Kit 劍蛋白p80抗體英文名稱:katanin p80 0.2ml
Inversin蛋白(INVS)ELISA試劑盒 INVS ELISA Kit 腎病樣蛋白1抗體英文名稱:KIRREL1 0.2ml
Intersectin2蛋白(ITSN2)ELISA試劑盒 ITSN2 ELISA Kit 組蛋白H3K9甲基轉(zhuǎn)移酶4抗體英文名稱:SETDB1 0.2ml
Intersectin1蛋白(ITSN1)ELISA試劑盒 ITSN1 ELISA Kit 鉀離子通道蛋白家族成員3抗體英文名稱:KCNE3 0.2ml
IgG-Fc片段受體Ⅱ(FcγRⅡ)ELISA試劑盒 FcγRⅡ ELISA Kit 角蛋白82抗體英文名稱:Keratin82 0.2ml
IgG-Fc片段結(jié)合蛋白(FcγBP)ELISA試劑盒 FcγBP ELISA Kit 細(xì)胞角膜蛋白多糖抗體英文名稱:Keratocan 0.1ml
IgG-Fc片段受體Ⅰ(FcγRⅠ)ELISA試劑盒 FcγRⅠ ELISA Kit 20號染色體開放閱讀框19抗體英文名稱:C20orf19 0.2ml
50T兔黏液瘤病毒(RMV)PCR檢測試劑盒250mL Anticoagulant ACD Solution(抗凝劑ACD) Anticoagulant ACD Solution 常溫保存
250mL Anticoagulant CPD Solution(抗凝劑CPD) Anticoagulant CPD Solution 常溫保存
250mL Anticoagulant CPDA-1 Solution(抗凝劑CPDA-1) Anticoagulant CPDA-1 Solution 常溫保存
250mL Anticoagulant EDTA Solution(抗凝劑EDTA) Anticoagulant EDTA Solution 常溫保存
250mL Antigen Retrieval Reagent,5X Antigen Retrieval Reagent,5X 常溫保存
10g ATP Solution(ATP溶液),100mM ATP Solution,100mM 常溫保存
100mL BES Buffer,0.5M,pH6.0 BES Buffer,0.5M,pH6.0 常溫保存
100mL BES Buffer,0.5M,pH6.5 BES Buffer,0.5M,pH6.5 常溫保存
100mL BES Buffer,0.5M,pH7.0 BES Buffer,0.5M,pH7.0 常溫保存
100mL BES Buffer,0.5M,pH7.4 BES Buffer,0.5M,pH7.4 常溫保存
500mL BES Buffered Saline,2X BES Buffered Saline,2X 常溫保存
50mL Beta Glycerophosphate Solution(beta-磷酸甘油溶液),100mM Beta Glycerophosphate Solution,100mM 常溫保存
250mL Beta-ME-EDTA Solution(beta-EDTA溶液) Beta-ME-EDTA Solution 常溫保存