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它具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針?lè)晒舛?RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱(chēng) |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
50T牛腺病毒3型(BAV-3)PCR檢測(cè)試劑盒 |
50T |
BH-P63922 |
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見(jiàn)下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
Enkurin蛋白(ENKUR)ELISA試劑盒 ENKUR ELISA Kit 白血病相關(guān)蛋白5抗體英文名稱(chēng):LEU5 0.2ml
Engrailed同源框蛋白2(EN2)ELISA試劑盒 EN2 ELISA Kit 富含亮氨酸重復(fù)蛋白62抗體英文名稱(chēng):LRRC62 0.2ml
Endoglin蛋白(ENG)ELISA試劑盒 ENG ELISA Kit 細(xì)胞磷蛋白磷酸酶相關(guān)蛋白抗體英文名稱(chēng):LPAP 0.1ml
Enamelin蛋白(ENAM)ELISA試劑盒 ENAM ELISA Kit 含亮氨酸神經(jīng)膠質(zhì)瘤失活蛋白4抗體英文名稱(chēng):LGI4 0.1ml
Enah/Vasp樣蛋白(EVL)ELISA試劑盒 EVL ELISA Kit 細(xì)胞性白血病相關(guān)序列1抗體英文名稱(chēng):LYL1 0.2ml
Embigin蛋白(EMB)ELISA試劑盒 EMB ELISA Kit L-瓜氨酸抗體英文名稱(chēng):L-Citrulline 0.1ml
E1A結(jié)合蛋白P300(EP300)ELISA試劑盒 EP300 ELISA Kit 半胱氨酸蛋白酶抗體英文名稱(chēng):Legumain 0.1ml
E1A激活基因阻遏子1(CREG1)ELISA試劑盒 CREG1 ELISA Kit 乳酸脫氫酶D抗體英文名稱(chēng):LDHD 0.2ml
D組著色性干皮病偶聯(lián)因子(XPD)ELISA試劑盒 XPD ELISA Kit 蛋白激酶LYK5抗體英文名稱(chēng):LYK5 0.2ml
D-天冬氨酸氧化酶(DDO)ELISA試劑盒 DDO ELISA Kit 促脂素gamma抗體英文名稱(chēng):lipotropin gamma 0.2ml
D-二聚體(D2D)ELISA試劑盒 D2D ELISA Kit 核纖層蛋白B受體抗體英文名稱(chēng):Lamin B Receptor 0.2ml
D-多巴色素變位酶(DDT)ELISA試劑盒 DDT ELISA Kit 長(zhǎng)壽相關(guān)基因lASS1抗體英文名稱(chēng):Ceramide synthase 1 0.2ml
D-氨基酸氧化酶激活因子(DAOA)ELISA試劑盒 DAOA ELISA Kit 長(zhǎng)壽相關(guān)基因lASS6抗體英文名稱(chēng):LASS6 0.2ml
Dystrotelin蛋白(DYTN)ELISA試劑盒 DYTN ELISA Kit 長(zhǎng)壽相關(guān)基因lASS3抗體英文名稱(chēng):LASS3 0.2ml
D-氨基酸氧化酶(DAO)ELISA試劑盒 DAO ELISA Kit 長(zhǎng)壽相關(guān)基因lASS5抗體英文名稱(chēng):LASS5 0.2ml
50T牛腺病毒3型(BAV-3)PCR檢測(cè)試劑盒250mL Casein Blocking Buffer in PBS(酪蛋白封堵劑) Casein Blocking Buffer in PBS 常溫保存
250mL Casein Blocking Buffer in TBS with azide(酪蛋白封堵劑) Casein Blocking Buffer in TBS with azide 常溫保存
250mL Casein Blocking Buffer in TBS(酪蛋白封堵劑) Casein Blocking Buffer in TBS 常溫保存
250mL Casein-Tween-20 in PBS Casein-Tween-20 in PBS 常溫保存
250mL Casein-Tween-20 in TBS Casein-Tween-20 in TBS 常溫保存
50mL Chaps Lysis Buffer Chaps Lysis Buffer 常溫保存
25mL Chaps Lysis Buffer,2X Chaps Lysis Buffer,2X 常溫保存
100mL CHES Buffer,0.5M,pH10.0 CHES Buffer,0.5M,pH10.0 常溫保存
100mL CHES Buffer,0.5M,pH8.5 CHES Buffer,0.5M,pH8.5 常溫保存
100mL CHES Buffer,0.5M,pH9.0 CHES Buffer,0.5M,pH9.0 常溫保存
100mL CHES Buffer,0.5M,pH9.5 CHES Buffer,0.5M,pH9.5 常溫保存
250mL Citrate Buffer(檸檬酸鹽緩沖液),0.5M,pH2.5 Citrate Buffer,0.5M,pH2.5 常溫保存
250mL Citrate Buffer(檸檬酸鹽緩沖液),0.5M,pH3.0 Citrate Buffer,0.5M,pH3.0 常溫保存