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服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
50T馬鏈球菌(S. equi)PCR檢測(cè)試劑盒 |
50T |
BH-P63932 |
它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
BH3相互作用域死亡激動(dòng)劑(Bid)ELISA試劑盒 Bid ELISA Kit LIN7C蛋白抗體英文名稱:LIN7C 0.2ml
Bcl2樣蛋白11(BCL2L11)ELISA試劑盒 BCL2L11 ELISA Kit 富含亮氨酸重復(fù)序列Nogo受體反應(yīng)蛋白4抗體英文名稱:LINGO4 0.2ml
Bcl2相關(guān)髓細(xì)胞白血病序列1(MCL1)ELISA試劑盒 MCL1 ELISA Kit 富含亮氨酸α2糖蛋白抗體英文名稱:LRG1 0.2ml
Bcl2拮抗/殺傷因子1(BAK1)ELISA試劑盒 BAK1 ELISA Kit 腦特異性磷脂酸磷酸酶樣蛋白1抗體英文名稱:LPPR4 0.2ml
Bcl2關(guān)聯(lián)永生基因3(BAG3)ELISA試劑盒 BAG3 ELISA Kit 跨膜蛋白TMEM176B抗體英文名稱:LR8 0.2ml
Bcl2關(guān)聯(lián)X蛋白(Bax)ELISA試劑盒 Bax ELISA Kit 富含亮氨酸重復(fù)跨膜神經(jīng)元蛋白2抗體英文名稱:LRRTM2 0.2ml
Battenin蛋白(BTS)ELISA試劑盒 BTS ELISA Kit 富含亮氨酸重復(fù)跨膜神經(jīng)元蛋白4抗體英文名稱:LRRTM4 0.2ml
Bassoon蛋白(BSN)ELISA試劑盒 BSN ELISA Kit LZIC蛋白抗體英文名稱:LZIC 0.2ml
Axotrophin蛋白(AXOT)ELISA試劑盒 AXOT ELISA Kit Lgi3蛋白抗體英文名稱:LGI3 0.2ml
Axis抑制蛋白2(AXIN2)ELISA試劑盒 AXIN2 ELISA Kit Lhx4蛋白抗體英文名稱:Lhx4 0.2ml
Attractin蛋白(ATRN)ELISA試劑盒 ATRN ELISA Kit 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SCDO3抗體英文名稱:Lunatic Fringe 0.2ml
Atrophin1蛋白(ATN1)ELISA試劑盒 ATN1 ELISA Kit RNA聚合酶相關(guān)蛋白LEO1抗體英文名稱:LEO1 0.1ml
ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G2(ABCG2)ELISA試劑盒 ABCG2 ELISA Kit 細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒蛋白抗體英文名稱:LCMV 0.2ml
ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白A4(ABCA4)ELISA試劑盒 ABCA4 ELISA Kit 黃體釋放/促性腺釋放抗體英文名稱:Gonadoliberin-1 0.2ml
ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G1(ABCG1)ELISA試劑盒 ABCG1 ELISA Kit 自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3A/3B抗體英文名稱:LC3A/B 0.1ml
50T馬鏈球菌(S. equi)PCR檢測(cè)試劑盒100mL Hybridization Solutions in SSC Hybridization Solutions in SSC 常溫保存
100mL Hybridization Solutions in SSPE Hybridization Solutions in SSPE 常溫保存
10mL Hygromycin B Solution Hygromycin B Solution 常溫保存
500mL IEF Anode Buffer,50X IEF Anode Buffer,50X 常溫保存
250mL IEF Cathode Buffer,10X IEF Cathode Buffer,10X 常溫保存
25mL IEF Sample Buffer,2X,pH 3-10 IEF Sample Buffer,2X,pH 3-10 常溫保存
25mL IEF Sample Buffer,4X,pH 3-7 IEF Sample Buffer,4X,pH 3-7 常溫保存
100mL Imidazole Buffer(咪唑緩沖液),0.5M,pH6.0 Imidazole Buffer,0.5M,pH6.0 常溫保存
100mL Imidazole Buffer(咪唑緩沖液),0.5M,pH6.5 Imidazole Buffer,0.5M,pH6.5 常溫保存
100mL Imidazole Buffer(咪唑緩沖液),0.5M,pH7.0 Imidazole Buffer,0.5M,pH7.0 常溫保存
100mL Imidazole Buffer(咪唑緩沖液),0.5M,pH7.4 Imidazole Buffer,0.5M,pH7.4 常溫保存
500mL Imidazole Buffered Saline(咪唑緩沖鹽水),5X,pH7.0 Imidazole Buffered Saline,5X,pH7.0 常溫保存
5g IPTG Solution(IPTG溶液),20% IPTG Solution,20% 常溫保存
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。