咨詢電話:18117197628
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
50T狂犬病毒(RV)PCR檢測試劑盒 |
50T |
BH-P63938 |
它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
Ⅲ型前膠原(PCⅢ)ELISA試劑盒 PCⅢ ELISA Kit 黃體釋放/促性腺釋放抗體英文名稱:GnRH-associated peptide I 0.2ml
Ⅲ型膠原交聯(lián)羧基端肽(CTXⅢ)ELISA試劑盒 CTXⅢ ELISA Kit 蛋白賴氨酸-6-氧化酶抗體英文名稱:LOX 0.2ml
Ⅲ型膠原α1(COL3α1)ELISA試劑盒 COL3α1 ELISA Kit 白細(xì)胞酪氨酸激酶受體抗體英文名稱:LTK 0.1ml
Ⅲ型膠原(COL3)ELISA試劑盒 COL3 ELISA Kit 同源盒轉(zhuǎn)錄因子LMX1A抗體英文名稱:LMX1A 0.2ml
Ⅱ型前膠原羧基端原肽(PⅡCP)ELISA試劑盒 PⅡCP ELISA Kit 轉(zhuǎn)化生長因子β1結(jié)合蛋白1抗體英文名稱:LTBP1 0.2ml
Ⅱ型前膠原氨基端原肽(PⅡNT)ELISA試劑盒 PⅡNT ELISA Kit 狂躁基因同源蛋白MFNG抗體英文名稱:Manic Fringe 0.2ml
Ⅱ型前膠原(PCⅡ)ELISA試劑盒 PCⅡ ELISA Kit E3泛素蛋白連接酶MIB1抗體英文名稱:Mib1 0.2ml
Ⅱ型膠原交聯(lián)羧基端肽(CTXⅡ)ELISA試劑盒 CTXⅡ ELISA Kit 主導(dǎo)控制樣蛋白1抗體英文名稱:MAML1 0.2ml
Ⅱ型膠原α1(COL2α1)ELISA試劑盒 COL2α1 ELISA Kit 主導(dǎo)控制樣蛋白2抗體英文名稱:MAML2 0.2ml
Ⅱ型膠原(COL2)ELISA試劑盒 COL2 ELISA Kit 絲裂原活化蛋白激酶6抗體英文名稱:MAPK6 0.2ml
Ⅱ類主要組織相容性復(fù)合體DQβ1(MHCDQβ1)ELISA試劑盒 MHCDQβ1 ELISA Kit 磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶MST4,MST3,STK25抗體英文名稱:phospho-MST4 + MST3 + STK25 (Thr178 + Thr190 + Thr174) 0.1ml
ⅡD組磷脂酶A2(PLA2G2D)ELISA試劑盒 PLA2G2D ELISA Kit 表皮生長因子樣蛋白Megf10抗體英文名稱:MEGF10 0.2ml
ⅡA組磷脂酶A2(PLA2G2A)ELISA試劑盒 PLA2G2A ELISA Kit MPP4蛋白抗體英文名稱:MPP4 0.2ml
Ⅰ型前膠原氨基端原肽(PⅠNP)ELISA試劑盒 PⅠNP ELISA Kit E3泛素連接酶MUL1抗體英文名稱:MUL1 0.2ml
Ⅰ型前膠原羧基端原肽(PⅠCP)ELISA試劑盒 PⅠCP ELISA Kit 微小染色體維持缺陷蛋白7抗體英文名稱:MCM7/CDC47 0.1ml
50T狂犬病毒(RV)PCR檢測試劑盒250mL MES Buffer,1.0M,pH5.5 MES Buffer,1.0M,pH5.5 常溫保存
250mL MES Buffer,1.0M,pH6.0 MES Buffer,1.0M,pH6.0 常溫保存
250mL MES Buffer,1.0M,pH6.5 MES Buffer,1.0M,pH6.5 常溫保存
250mL MES Buffer,1.0M,pH7.0 MES Buffer,1.0M,pH7.0 常溫保存
250mL MES Buffer,1.0M,pH7.4 MES Buffer,1.0M,pH7.4 常溫保存
250mL MES Buffer,1.0M,pH7.5 MES Buffer,1.0M,pH7.5 常溫保存
250mL MES Buffer,1.0M,pH8.0 MES Buffer,1.0M,pH8.0 常溫保存
250mL MES Buffer,1.0M,pH8.5 MES Buffer,1.0M,pH8.5 常溫保存
250mL MES Buffer,1.0M,pH9.0 MES Buffer,1.0M,pH9.0 常溫保存
500mL MES Buffered Saline,5X,pH6.5 MES Buffered Saline,5X,pH6.5 常溫保存
500mL MES Buffered Saline,5X,pH7.0 MES Buffered Saline,5X,pH7.0 常溫保存
250ML MES Lysis Buffer with NP-40 MES Lysis Buffer with NP-40 常溫保存
125mL MES Lysis Buffer with NP-40,2X MES Lysis Buffer with NP-40,2X 常溫保存
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。