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它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設計,不會跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
服務流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結果交付——售后服務。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
50T西尼羅河病毒(WNV)PCR檢測試劑盒 |
50T |
BH-P63940 |
實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)ELISA試劑盒 8-OHdG ELISA Kit 組織相容性復合體2抗體英文名稱:MHC Class II 0.1ml
8-羥基鳥嘌呤糖苷酶1(OGG1)ELISA試劑盒 OGG1 ELISA Kit 磷酸化雷帕霉素靶蛋白抗體英文名稱:Phospho-mTOR (Tyr144) 0.1ml
88kDa核孔蛋白(NUP88)ELISA試劑盒 NUP88 ELISA Kit 甲基化CpG結合蛋白2抗體英文名稱:MeCP2 0.1ml
85kDa核孔蛋白(NUP85)ELISA試劑盒 NUP85 ELISA Kit 磷酸化雷帕霉素靶蛋白抗體英文名稱:Phospho-mTOR (Thr2446) 0.1ml
7-脫氫膽固醇還原酶(DHCR7)ELISA試劑盒 DHCR7 ELISA Kit NADH復合體6抗體英文名稱:MT-ND6 0.1ml
70kDa熱休克蛋白結合蛋白1(HSPBP1)ELISA試劑盒 HSPBP1 ELISA Kit 黑色素瘤相關抗原11抗體英文名稱:MAGEA11 0.2ml
70kDa熱休克蛋白9(HSPA9)ELISA試劑盒 HSPA9 ELISA Kit 同源盒基因Msx2抗體英文名稱:Msx2 0.2ml
70kDa熱休克蛋白8(HSPA8)ELISA試劑盒 HSPA8 ELISA Kit 磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶MARK4抗體英文名稱:phospho-MARK4(Ser423) 0.1ml
70kDa熱休克蛋白5(HSPA5)ELISA試劑盒 HSPA5 ELISA Kit 膜型基質(zhì)金屬蛋白酶胞質(zhì)尾結合蛋白1抗體英文名稱:MTCBP1 0.2ml
70kDa熱休克蛋白4(HSPA4)ELISA試劑盒 HSPA4 ELISA Kit 細胞周期調(diào)節(jié)蛋白P95抗體英文名稱:p95 NBS1 0.2ml
70kDa熱休克蛋白1樣蛋白(HSPA1L)ELISA試劑盒 HSPA1L ELISA Kit 自噬微管相關蛋白輕鏈β3抗體英文名稱:MAP LC3 Beta 0.1ml
70kDa熱休克蛋白1B(HSPA1B)ELISA試劑盒 HSPA1B ELISA Kit 有絲分裂細胞周期蛋白MPP9抗體英文名稱:MPP9 0.2ml
70kDa熱休克蛋白1A(HSPA1A)ELISA試劑盒 HSPA1A ELISA Kit 減數(shù)分裂特異核結構蛋白1抗體英文名稱:MNS1 0.2ml
6-丙酮酰四氫蝶呤合酶(PTS)ELISA試劑盒 PTS ELISA Kit 珠蛋白1抗體英文名稱:Mammaglobin A 0.2ml
6-磷酸葡糖酸內(nèi)酯酶(PGLS)ELISA試劑盒 PGLS ELISA Kit 肌球蛋白相互作用G蛋白交換因子抗體英文名稱:MyoGEF 0.2ml
50T西尼羅河病毒(WNV)PCR檢測試劑盒100mL MOPS Buffer,0.5M,pH7.5 MOPS Buffer,0.5M,pH7.5 常溫保存
100mL MOPS Buffer,0.5M,pH8.0 MOPS Buffer,0.5M,pH8.0 常溫保存
100mL MOPS Buffer,0.5M,pH8.5 MOPS Buffer,0.5M,pH8.5 常溫保存
100mL MOPS Buffer,0.5M,pH9.0 MOPS Buffer,0.5M,pH9.0 常溫保存
250mL MOPS Buffer,1.0M,pH5.5 MOPS Buffer,1.0M,pH5.5 常溫保存
250mL MOPS Buffer,1.0M,pH6.0 MOPS Buffer,1.0M,pH6.0 常溫保存
250mL MOPS Buffer,1.0M,pH6.5 MOPS Buffer,1.0M,pH6.5 常溫保存
250mL MOPS Buffer,1.0M,pH7.0 MOPS Buffer,1.0M,pH7.0 常溫保存
250mL MOPS Buffer,1.0M,pH7.4 MOPS Buffer,1.0M,pH7.4 常溫保存
250mL MOPS Buffer,1.0M,pH7.5 MOPS Buffer,1.0M,pH7.5 常溫保存
250mL MOPS Buffer,1.0M,pH8.0 MOPS Buffer,1.0M,pH8.0 常溫保存
250mL MOPS Buffer,1.0M,pH8.5 MOPS Buffer,1.0M,pH8.5 常溫保存
250mL MOPS Buffer,1.0M,pH9.0 MOPS Buffer,1.0M,pH9.0 常溫保存