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注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
50T牛流行熱病毒(BEFV)PCR檢測(cè)試劑盒 |
50T |
BH-P63942 |
它具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針?lè)晒舛?RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見(jiàn)下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4-氨基丁酸轉(zhuǎn)氨酶(ABAT)ELISA試劑盒 ABAT ELISA Kit RNA相關(guān)結(jié)合蛋白MCG10抗體英文名稱:MCG10 0.2ml
43kDa核孔蛋白(NUP43)ELISA試劑盒 NUP43 ELISA Kit 線粒體核糖體蛋白S4抗體英文名稱:MRPS4 0.1ml
3-羥基異丁酸脫氫酶(HIBADH)ELISA試劑盒 HIBADH ELISA Kit 緊密連接蛋白MUPP1抗體英文名稱:MUPP1 0.2ml
3-羥基丁酸脫氫酶2(BDH2)ELISA試劑盒 BDH2 ELISA Kit 肌管素相關(guān)蛋白14抗體英文名稱:MTMR14 0.2ml
3-羥基丁酸脫氫酶1(BDH1)ELISA試劑盒 BDH1 ELISA Kit 小腦癥基因1/認(rèn)知相關(guān)蛋白抗體英文名稱:Microcephalin 1/BRIT1 0.2ml
37kDa核孔蛋白(NUP37)ELISA試劑盒 NUP37 ELISA Kit 鋅指蛋白60抗體英文名稱:Miz1/ZNF60 0.2ml
35kDa核孔蛋白(NUP35)ELISA試劑盒 NUP35 ELISA Kit 肌球蛋白6抗體英文名稱:MYO6 0.2ml
3',5'-二磷酸核苷酸酶1(BPNT1)ELISA試劑盒 BPNT1 ELISA Kit 肌肉素抗體英文名稱:Musclin 0.2ml
2-氨基乙硫醇雙加氧酶(ADO)ELISA試劑盒 ADO ELISA Kit 代謝型谷氨酸受體-3抗體英文名稱:MGLUR3 0.2ml
27kDa熱休克蛋白(HSPB1)ELISA試劑盒 HSPB1 ELISA Kit 促代謝型谷氨酸受體2+3抗體英文名稱:MGLUR2 + MGLUR3 0.2ml
26S-蛋白酶體(26S-PSM)ELISA試劑盒 26S-PSM ELISA Kit 促代謝型谷氨酸受體1+5抗體英文名稱:MGLUR1 + MGLUR5 0.2ml
25-羥基維生素D3(HVD3)ELISA試劑盒 HVD3 ELISA Kit MHC I類鏈相關(guān)蛋白A/組織相容性復(fù)合物MHCIa抗體英文名稱:MICA 0.1ml
24-脫氫膽固醇還原酶(DHCR24)ELISA試劑盒 DHCR24 ELISA Kit 肌肉特異性環(huán)指蛋白2抗體英文名稱:MURF2 0.2ml
210kDa核孔蛋白(NUP210)ELISA試劑盒 NUP210 ELISA Kit 磷酸化原癌基因c-Met相關(guān)酪氨酸激酶抗體英文名稱:phospho-MST1R(Tyr1353) 0.1ml
214kDa核孔蛋白(NUP214)ELISA試劑盒 NUP214 ELISA Kit 肌肉特異性環(huán)指蛋白3抗體英文名稱:MURF3 0.2ml
50T牛流行熱病毒(BEFV)PCR檢測(cè)試劑盒500mL Normal Tyrode’s Bicarbonate Buffered Solution Normal Tyrode’s Bicarbonate Buffered Solution 常溫保存
125mL NP40 Lysis Buffer with Glycerol,2X(含甘油型NP40裂解液,2X) NP40 Lysis Buffer with Glycerol,2X 常溫保存
250mL NP40 Lysis Buffer(NP40裂解液) NP40 Lysis Buffer 常溫保存
125mL NP40 Lysis Buffer,2X(NP40裂解液,2X) NP40 Lysis Buffer,2X 常溫保存
250mL NP40 Lysis Buffer,High Salt(高鹽型NP40裂解液) NP40 Lysis Buffer,High Salt 常溫保存
250mL NP40 Lysis Buffer,Low Salt(低鹽型NP40裂解液) NP40 Lysis Buffer,Low Salt 常溫保存
250mL NP40 Permeating Solution in PBS,10X(NP40滲透液,10X) NP40 Permeating Solution in PBS,10X 常溫保存
250mL NP40 Permeating Solution in TBS,10X(NP40滲透液,10X) NP40 Permeating Solution in TBS,10X 常溫保存
250mL Nylon Membrane Stripping Buffer,10X(尼龍膜剝離緩沖液,10X) Nylon Membrane Stripping Buffer,10X 常溫保存
25mL Orange-G Loading Dye (6X, Glycerol based) Orange-G Loading Dye (6X, Glycerol based) 常溫保存
10mL Orange-G/Blue Dye (6X,triple tracker,Ficoll based) Orange-G/Blue Dye (6X,triple tracker,Ficoll based) 常溫保存
25mL Orange-G/Blue Dye (6X,triple tracker,Glycerol based) Orange-G/Blue Dye (6X,triple tracker,Glycerol based) 常溫保存
250mL Para-formaldehyde fixative Solution Para-formaldehyde fixative Solution 常溫保存