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它具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針?lè)晒舛?RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱(chēng) |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
50T百日咳桿菌(BP)PCR檢測(cè)試劑盒 |
50T |
BH-P64022 |
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見(jiàn)下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
蛋白磷酸酶γ1抗體英文名稱(chēng):PP1C gamma 0.1ml
核苷酸還原酶M2B抗體英文名稱(chēng):p53R2 0.1ml
磷酸二酯酶4A抗體英文名稱(chēng):PDE4A 0.1ml
絲束蛋白T Plastin抗體英文名稱(chēng):PLASTIN3 0.2ml
神經(jīng)叢蛋白A2抗體英文名稱(chēng):Plexin A2 0.1ml
網(wǎng)蛋白抗體英文名稱(chēng):Plectin 0.2ml
前列腺高表達(dá)蛋白1抗體英文名稱(chēng):PTOV1 0.2ml
磷酸化抑制基因P53抗體英文名稱(chēng):phospho-P53(Thr55) 0.1ml
嘌呤ATP受體抗體英文名稱(chēng):P2Y2 0.2ml
磷酸化絲裂原活化蛋白激酶p38抗體英文名稱(chēng):phospho-p38 MAPK (Thr180 + Tyr182) 0.1ml
果膠酶抑制蛋白18抗體英文名稱(chēng):Pectinesterase inhibitor 18 1ml
α型-過(guò)氧化酶活化增生受體抗體(PPAR α, PPAR-α)英文名稱(chēng):PPAR alpha 0.1ml
同源盒蛋白HOXB13抗體英文名稱(chēng):PSGD/HOXB13 0.2ml
磷酸化P63抑制基因抗體英文名稱(chēng):Phospho-p63 (Ser160+Ser162) 0.1ml
磷酸化3磷酸肌醇依賴(lài)性蛋白激酶1抗體英文名稱(chēng):Phospho-PDPK1(Ser393) 0.1ml
50T百日咳桿菌(BP)PCR檢測(cè)試劑盒M-H瓊脂平板 用于藥敏試驗(yàn)瓊脂稀釋法及擴(kuò)散法。 90mmX20個(gè)
MRS培養(yǎng)基(莫匹羅星鋰鹽改良MRS培養(yǎng)基基礎(chǔ)) 用于乳酸的分離、計(jì)數(shù)和培養(yǎng),每100mL培養(yǎng)基添加1支配套試劑(SR0370),可單獨(dú)用于雙歧桿的分... 250g
MRS肉湯培養(yǎng)基 用于乳酸的培養(yǎng) 250g
MUGal(4-甲基傘形酮-β-半乳萄糖苷)肉湯 用于多管發(fā)酵法快速檢測(cè)大腸群 100g
MUG培養(yǎng)基 用于大腸埃希氏的快速測(cè)定,可觀察熒光和吲哚試驗(yàn)。 5mlX20支
MUG營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 用于濾膜法測(cè)定生活飲用水及其水源水中的大腸埃希氏(GB/T5750.12-2006)。 100g
OF(Hugh-leifson) 生化鑒定 20支/盒
OXA瓊脂平板(牛津瓊脂平板) 用于李斯特氏的選擇性分離培養(yǎng)。(SN、美國(guó)FDA) 90mmX20個(gè)
PALCAM瓊脂凍干配套試劑 每支添加于100ml(026070)中配成PALCAM瓊脂。 10支
PALCAM瓊脂凍干配套試劑 每支添加于100ml(026070)中配成PALCAM瓊脂。 10支/盒
PALCAM瓊脂基礎(chǔ) 用于單增李斯特氏的選擇性分離培養(yǎng)(GB 4789.30-2010和SN/T0184-2005)。 250g
PALCAM瓊脂平板 用于李斯特氏的選擇性分離培養(yǎng)。(GB、SN、美國(guó)FDA) 90mmX20個(gè)
Pfizer 選擇性腸球瓊脂培養(yǎng)基 用于多管發(fā)酵法測(cè)定水中腸球的確證試驗(yàn)(CJ/T148-2001和SN/T2206.5-2009)。 100g