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服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
50T普氏立克次體(RP)PCR檢測試劑盒 |
50T |
BH-P64038 |
它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計,不會跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
多囊腎蛋白1抗體英文名稱:Polycystin 1 0.2ml
多囊腎蛋白2抗體英文名稱:Polycystin 2 0.2ml
凋亡相關(guān)蛋白4抗體英文名稱:PDCD4 0.2ml
磷脂酰肌醇激酶催化亞單位D抗體英文名稱:PI3 Kinase p110 delta 0.1ml
血小板源性生長因子受體β樣蛋白抗體英文名稱:PDGFRL 0.2ml
磷酸化磷酯酶Cβ3抗體英文名稱:Phospho-PLC beta3 (Ser1105) 0.1ml
磷酸化蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶抗體英文名稱:Phospho-PERK(Thr980) 0.1ml
6磷酸果糖激酶2抗體英文名稱:PFK2 0.2ml
磷酸化6磷酸果糖激酶2抗體英文名稱:Phospho-PFK2 (Ser467) 0.1ml
磷酸化磷脂酰肌醇激酶抗體英文名稱:phospho-PI3 kinase p85 alpha + gamma (Tyr467 + Tyr199) 0.1ml
磷酸化蛋白激酶C α/β2抗體英文名稱:Phospho-PKC alpha/beta II (Thr638/641) 0.1ml
蛋白激酶C α抗體英文名稱:PKC alpha 0.2ml
磷酸化丙酮酸激酶M2抗體英文名稱:Phospho-PKM2 (Tyr105) 0.1ml
磷酸化蛋白激酶R抗體英文名稱:Phospho-PKR (Thr451) 0.1ml
磷酸化蛋白激酶R抗體英文名稱:Phospho-PKR (Thr446) 0.1ml
50T普氏立克次體(RP)PCR檢測試劑盒甘油 每支添加于100mL(027050)、(027051)、(027052)或(027053)中。 2mL/支×10
甘油 每支添加于100ml(027050)、(027051)、(027052)或(027053)中 10支/盒
甘油(綠膿素測定用培養(yǎng)基配套試劑) 每支添加于100ml(027051)中配成綠膿素測定用培養(yǎng)基。 250g
甘油發(fā)酵管 生化鑒定 20支/盒
肝臟胃蛋白酶消化物 用于培養(yǎng)基、生物發(fā)酵的原材料 25kg
干熱滅套裝 能直接暴露于高溫空氣或浸沒于油與其他非水溶劑中獨特的生物指示劑 100支/盒
干熱滅指示標(biāo)簽 干熱滅指示標(biāo)簽(DHI Labels)能清楚地將滅和未滅的物品區(qū)分開。 標(biāo)簽上有化學(xué)指示劑,當(dāng)... 1000片/卷
高敏感度大腸群計數(shù)板 用于大腸群計數(shù),24小時可確定大腸群數(shù) 25片/袋
高氏合成1號瓊脂培養(yǎng)基 供放線培養(yǎng)用。 250g
高鹽察氏培養(yǎng)基 用于飼料中霉的檢驗(GB13092-91)。 250g
高鹽察氏培養(yǎng)基 用于飼料中霉的檢驗 250g
哥倫比亞CNA血瓊脂配套試劑 每支含1mg多粘素和1mg萘啶酸,添加于100mL哥倫比亞瓊脂(024061)。用于一般病原的分離培養(yǎng)和溶... 10支/盒
哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基 滅后冷至45℃左右時加入5%脫纖維羊血,用于空腸彎曲的培養(yǎng)。(CP、GB、EP、USP) 250g
注意事項:
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。