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服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
50T馬源性成分(Horse)PCR檢測(cè)試劑盒 |
50T |
BH-P64098 |
它具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針?lè)晒舛?RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見(jiàn)下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
Ras-GTP酶激活蛋白3抗體英文名稱:RASA3 0.2ml
神經(jīng)內(nèi)特異性蛋白抗體英文名稱:Reticulon 1 0.2ml
視黃醇脫氫酶11/丙型肝炎病毒核心蛋白抗體英文名稱:RDH11 0.2ml
維甲酸相關(guān)孤兒受體β抗體英文名稱:ROR beta 0.2ml
G蛋白GTP-GDP解離刺激因子1抗體英文名稱:RAP1GDS1 0.1ml
ras癌基因家族Rab3A--Rab3D抗體英文名稱:Rab3A+Rab3B+Rab3C+Rab3D 0.2ml
鳥(niǎo)嘌呤核苷酸交換因子rasgef1a抗體英文名稱:RASGEF1A 0.2ml
胰腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白RLLM1抗體英文名稱:RLLM1 0.2ml
環(huán)指蛋白45/自運(yùn)動(dòng)因子受體抗體英文名稱:RNF45 0.2ml
維甲酸相關(guān)孤兒受體α抗體英文名稱:ROR alpha 0.2ml
維甲酸相關(guān)孤兒受體γ抗體英文名稱:RORG 0.1ml
癌基因RAS相關(guān)蛋白R(shí)ab4A抗體英文名稱:RAB4 0.2ml
ATP調(diào)節(jié)鉀離子通道ROM K抗體英文名稱:ROM-K 0.2ml
視黃醇脫氫酶10抗體英文名稱:RDH10 0.1ml
ras基因相關(guān)蛋白R(shí)ab24抗體英文名稱:Rab24 0.2ml
50T馬源性成分(Horse)PCR檢測(cè)試劑盒TTC營(yíng)養(yǎng)瓊脂 TTC Nutrient Agar 250g
營(yíng)養(yǎng)肉湯(NB) Nutrient Broth 250g
營(yíng)養(yǎng)瓊脂(NA) Nutrient Agar 250g
2216E瓊脂 2216E Agar 250g
標(biāo)準(zhǔn)I號(hào)營(yíng)養(yǎng)瓊脂 Standard I Nutrient Agar 250g
胰胨大豆胨固綠瓊脂 Tryptic Soy Fast Green Agar 250g
m-TGE肉湯 m-TGE Broth 250g
水平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基 Water Plate Count Agar 250g
R2A瓊脂 R2A Agar 250g
TGE瓊脂 TGE Medium 250g
CVT瓊脂 CVT Agar 250g
酵母粉瓊脂 Yeast Extract Agar 250g
平板計(jì)數(shù)瓊脂(含麥芽提取物) Plate Count Agar 250g
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。