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| 產(chǎn)品名稱 |
人ISL人LIM同源框蛋白1(ISL1)博湖ELISA試劑盒 |
| 英文名稱 |
Human ISL LIM Homeobox Protein 1(ISL1)ELISA Kit |
| 貨號 |
PH103254 |
2、標準品standard：2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根過氧化物酶標記親和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。
試劑準備：
1. 使用前將所有的試劑和標本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標準品(凍干品)：每瓶標準品加入標準品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準備7個稀釋標準品的EP管，每個EP管中加入150μL的標準品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標準品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進行30倍稀釋。
樣本實驗前準備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
（2）血漿：
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
（4）細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。
（5）培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
（6）組織標本
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
注意事項：
1. 試劑盒應在有效期內(nèi)使用，請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應保存在 2-8℃冰箱，已復溶但未用完的標準品，請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標準品和樣本建議作復孔檢測，且加入試劑的順序應保持一致。
5. 為避免交叉污染，請在試驗中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時，請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結(jié)果準確，每次檢測均需做標準曲線。
小鼠組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒 ，英文名： TPA ELISA Kit
小鼠組織蛋白去乙?；?(Hdac2/Yy1bp)ELISA試劑盒 ，英文名： Hdac2/Yy1bp ELISA Kit
小鼠組織蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA試劑盒 ，英文名： HD ELISA Kit
小鼠組織蛋白酶K(cath-K)ELISA試劑盒 ，英文名： cath-K ELISA Kit
小鼠組蛋白脫乙酰酶(HDAC1)ELISA試劑盒 ，英文名： HDAC1 ELISA Kit
小鼠組蛋白去乙?；?(HDAC4)ELISA試劑盒 ，英文名： HDAC4 ELISA Kit
小鼠組蛋白去乙?；?(HDAC3)ELISA試劑盒 ，英文名： HDAC3 ELISA Kit
小鼠組蛋白H2b(histon-H2b)ELISA試劑盒 ，英文名： histon-H2b ELISA Kit
小鼠組胺(HIS)ELISA試劑盒 ，英文名： HIS ELISA Kit
小鼠總蛋白C(TPC)ELISA試劑盒 ，英文名： TPC ELISA Kit
小鼠總膽紅素(TB)ELISA試劑盒 ，英文名： TB ELISA Kit
小鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA試劑盒 ，英文名： TFR/CD71 ELISA Kit
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGF-β3)ELISA試劑盒 ，英文名： TGF-β3 ELISA Kit
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGF-β2)ELISA試劑盒 ，英文名： TGF-β2 ELISA Kit
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒 ，英文名： TGFβ2 ELISA Kit
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒 ，英文名： TGF-β1 ELISA Kit
phospho-ABCA1 (Ser2054) 磷酸化腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1抗體
phospho-Aconitase 1 (Ser138) 磷酸化鐵調(diào)節(jié)蛋白1抗體
phospho-Aconitase 1 (Ser711) 磷酸化鐵調(diào)節(jié)蛋白1抗體
phospho-Acetyl Coenzyme A Carboxylase beta (Ser220) 磷酸化乙酰輔酶A羧化酶抗體
Annexin VI 膜粘連蛋白6抗體
ANKRD42 錨蛋白重復結(jié)構(gòu)域蛋白42抗體
Anillin 胞環(huán)蛋白肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體
Adenovirus 5 E1A binding protein 腺病毒5結(jié)合蛋白BS69抗體(骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體相關分子1)
APOA1 載脂蛋白A1抗體
ATG16L 自噬相關蛋白16A抗體
phospho-ATG4D(Ser15) 磷酸化自噬相關蛋白4D抗體
Phospho-ATG4C(Ser451) 磷酸化自噬相關蛋白4C抗體
phospho-ATG7(Ser95) 磷酸化自噬相關蛋白7抗體
phospho-ATG16A(Ser287) 磷酸化自噬相關蛋白16A抗體
phospho-ATG9A(Ser735) 磷酸化自噬相關蛋白9A抗體
phospho-ATG4D(Ser341) 磷酸化自噬相關蛋白4D抗體
phospho-ATG4D(Ser467) 磷酸化自噬相關蛋白4D抗體
人ISL人LIM同源框蛋白1(ISL1)博湖ELISA試劑盒phospho-TEM8 (Tyr382) 磷酸化血管內(nèi)皮標志物8抗體
phospho-ATG4A(Ser100) 磷酸化自噬相關蛋白4A抗體
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。
（2）酶標板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
（5）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（6）洗板，同（4）。
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
（8）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。