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試劑配制:
1、酶聯(lián)板assay plate :一塊96孔或者48孔。
試劑準(zhǔn)備:
我司主營(yíng)產(chǎn)品之一,產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn),并經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測(cè),我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量,從而保證您的實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。產(chǎn)品供貨周期短,供貨及時(shí),且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。
產(chǎn)品名稱(chēng)
人5羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(SERT)博湖ELISA試劑盒
英文名稱(chēng)
Human Serotonin Transporter(SERT)ELISA Kit
貨號(hào)
PH103622
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
注意事項(xiàng):
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,請(qǐng)不要使用過(guò)期的試劑。
操作流程:
低聚果糖-蔗果三糖0.99 20mg
二十五烷0.997 20mg
克拉霉素(含干冰運(yùn)輸費(fèi))0.993 100mg
3--4-硝基甲0.985 100mg
阿替洛爾0.98 100mg
酸性橙 20(C.I.14600)0.97 100mg
3,3',5,5'-四甲基胺0.999 100mg
利福平0.951 100mg
2,3-二甲0.996 100mg
利福昔明0.989 100mg線粒體二羧酸載體蛋白抗體
運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元生存蛋白1
溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族44成員1抗體
轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族39成員7抗體
突觸結(jié)合蛋白1抗體
磷酸化突觸結(jié)合蛋白1抗體
SYF2蛋白抗體
突觸結(jié)合蛋白5抗體
外紡錘體極樣蛋白1抗體
膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶2抗體
S100A14/15抗體
Saitohin蛋白抗體
線粒體琥珀酸脫氫酶D抗體
人5羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(SERT)博湖ELISA試劑盒GilZ/TilZ 糖皮質(zhì)誘導(dǎo)亮氨酸拉鏈蛋白抗體 0.2ml
視黃醇脫氫酶8(RDH8)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Retil Dehydrogenase 8 (RDH8) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
GNAO1/G0 Protein alpha G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合蛋白O亞基A2抗體 0.2ml
耳蝶呤2(OTOP2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Otopetrin 2 (OTOP2) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
BMP11 骨形態(tài)發(fā)生蛋白11抗體 0.2ml
中腦核仁蛋白(MIDN)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Midlin (MIDN) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
AP2 alpha 轉(zhuǎn)錄激活蛋白2α抗體 0.1ml
甘油磷酸-O-?;D(zhuǎn)移酶(GNPAT)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Glyceronephosphate-O-Acyltransferase (GNPAT) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
DNase II 脫氧核糖核酸酶2抗體 0.2ml
D2-羥基戊二酸二乙酯脫氫酶(D2HGDH)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for D2-Hydroxyglutarate Dehydrogenase (D2HGDH) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
phospho-TRIM25(Ser100) 磷酸化雌反應(yīng)指狀蛋白抗體 0.1ml
扣帶蛋白(CGN)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Cingulin (CGN) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard:2瓶?jī)龈善贰?br>
3、樣品稀釋液sample diluent:1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent:1×10ml/瓶。
5、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent:1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody:1×120μl/瓶1:100
7、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin:1×120μl/瓶1:100
8、底物溶液tmb e:1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer:1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution:1×10ml/瓶2n h2so4。
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC),試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管,每個(gè)EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度, 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液:用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL,進(jìn)行30倍稀釋。
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
2. 試劑盒未使用時(shí)應(yīng)保存在 2-8℃冰箱,已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品,請(qǐng)丟棄。
3. 試劑盒使用前請(qǐng)?jiān)谑覝鼗謴?fù) 30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測(cè),且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染,請(qǐng)?jiān)谠囼?yàn)中使用 1 次性試管,槍頭,封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,在運(yùn)輸過(guò)程中微量液體會(huì)沾到管壁及瓶蓋上,使用前請(qǐng)離心處理(5-10 S 即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時(shí),請(qǐng)用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請(qǐng)不要使用其他來(lái)源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確,每次檢測(cè)均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過(guò)夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。
蠟酸0.961 20mg