試劑配制:

1、酶聯(lián)板assay plate ：一塊96孔或者48孔。
2、標準品standard：2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根過氧化物酶標記親和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。

試劑準備：
1. 使用前將所有的試劑和標本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標準品(凍干品)：每瓶標準品加入標準品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準備7個稀釋標準品的EP管，每個EP管中加入150μL的標準品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標準品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進行30倍稀釋。

我司主營產(chǎn)品之一，產(chǎn)品皆嚴格按照相關標準進行生產(chǎn)，并經(jīng)過了嚴格地反復地檢測，我們以嚴謹?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質量，從而保證您的實驗順利進行。產(chǎn)品供貨周期短，供貨及時，且我司還提供完整的售前和售后服務。本公司產(chǎn)品僅用于科研。

樣本實驗前準備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
（2）血漿：
應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
（4）細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。
（5）培養(yǎng)細胞
檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
（6）組織標本
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

注意事項：

1. 試劑盒應在有效期內使用，請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應保存在 2-8℃冰箱，已復溶但未用完的標準品，請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標準品和樣本建議作復孔檢測，且加入試劑的順序應保持一致。
5. 為避免交叉污染，請在試驗中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結合物的體積較少，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時，請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結果準確，每次檢測均需做標準曲線。

操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。 
（2）酶標板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內反應液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。 
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
庚酸0.996 1mL

D(+)-海藻糖二水合物0.995 250mg

2,6-二叔丁基對(BHT)0.99 250mg

生物素(維生素H)0.993 250mg

2-壬酮0.995 1mL

敵草胺0.998 100mg

頭孢啉鈉鹽(含干冰運輸費)0.993 100mg

正二十八烷0.994 250mg

乙醛-2,4-二硝基腙0.993 100mg

間0.999 100mg

溶劑黃560.962 100mg鈉通道蛋白11α抗體

鈉離子通道β1抗體

鈉通道蛋白8α抗體

絲氨酸蛋白酶抑制劑B12抗體

絲氨酸蛋白酶抑制劑B10抗體

5-羥色胺受體3C抗體

5-羥色胺受體3B抗體

SCYL結合蛋白1抗體

鉻細胞瘤患者抑基因SDHB抗體

調控周期蛋白依賴蛋白激酶SEI1抗體

肌漿/內質網(wǎng)鈣ATP酶2抗體

跨膜蛋白Sema3C抗體

類固醇5α還原酶2抗體

小鼠總膽紅素(TB)免費代測ELISA KitAMBP/Alpha 1 microglobulin  α1微球蛋白抗體 0.2ml

抗核糖體抗體(Anti-rRNP)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Anti-Ribosomal RNP Antibody (Anti-rRNP)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

MCHR/GPR24  G蛋白偶聯(lián)受體24抗體 0.1ml

二氫嘧啶脫氫酶(DPYD)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Dihydropyrimidine Dehydrogenase (DPYD)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

TIMM17A  線粒體內膜轉位酶抗體 0.2ml

組織型纖溶酶原激活因子(tPA)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Plasmigen Activator, Tissue (tPA)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

Nucleostemin  核干細胞因子抗體(鳥嘌呤核苷酸結合蛋白3) 0.2ml

α-乳清蛋白(αLA)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Alpha-Lactalbumin (aLA)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

Mkl1/MRTF-A  myocardin相關轉錄因子抗體 0.2ml

髓鞘堿性蛋白(MBP)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Myelin Basic Protein (MBP)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

CARD15  凋亡加強結構域蛋白15抗體 0.2ml

雨蛙素(INN)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Ceruletide (INN)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)