操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。 
（2）酶標板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。

我司主營產(chǎn)品之一，產(chǎn)品皆嚴格按照相關(guān)標準進行生產(chǎn)，并經(jīng)過了嚴格地反復(fù)地檢測，我們以嚴謹?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量，從而保證您的實驗順利進行。產(chǎn)品供貨周期短，供貨及時，且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。

試劑配制:

1、酶聯(lián)板assay plate ：一塊96孔或者48孔。
2、標準品standard：2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根過氧化物酶標記親和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。

試劑準備：
1. 使用前將所有的試劑和標本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標準品(凍干品)：每瓶標準品加入標準品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準備7個稀釋標準品的EP管，每個EP管中加入150μL的標準品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標準品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進行30倍稀釋。

樣本實驗前準備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
（4）細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。
（5）培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標本
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

注意事項：

1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標準品，請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標準品和樣本建議作復(fù)孔檢測，且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染，請在試驗中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時，請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結(jié)果準確，每次檢測均需做標準曲線。
5-乙酰-2-溴吡分子式：200.04分子量： C7H6BrNO英文名稱：5- acetyl -2-CAS號：139042-59-4

1,5-五亞甲-1H-四分子式：138.17分子量： C6H10N4英文名稱：1,5- five -1H- fourCAS號：54-95-5

(4S,5S)-(-)-4-甲氧甲-2-甲-5--2-惡啉分子式：205.26分子量： C12H15NO2英文名稱：(4S, 5S) - (-) -4- methyl -2- phenyl -2- methyl -5- oxazolineCAS號：52075-14-6

1,2-萘二甲腈分子式：178.19分子量： C12H6N2英文名稱：1,2- naphthalene twoCAS號：19291-76-0

2-甲-2-丁硫英文名稱：2- methyl -2-CAS號：1679-09-0分子式：104.21分子量： C5H12S

蒽酮紫79英文名稱：Violanthrone 79CAS號：85652-50-2分子式：712.93分子量： C50H48O4

積雪草苷英文名稱：Snow coverCAS號：16830-15-2分子式：959.12分子量：C48H78O19

草酰二分子式：118.09分子量： C2H6N4O2；NH2NHCOCONHNH2英文名稱：Two hydrazineCAS號：996-98-5

頭孢拉定英文名稱：Setting of theCAS號：38821-53-3分子式：349.41分子量： C16H19N3O4S

α,α'-對二甲分子式：288.39分子量： C20H20N2英文名稱：Alpha, alpha '- two aniline xyleneCAS號：13170-62-2食蟹猴 CD90 / THY-1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

食蟹猴 CD90 / THY-1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

Immunoprecipitation/ IP Kit - Anti-Copine I / CPN1 Immunomagnetic Beads IP    5 mL

大鼠 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

Immunoprecipitation/ IP Kit - Anti-TNFAIP8 Immunomagnetic Beads IP    5 mL

大鼠 LILRA5 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

重組小鼠 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 蛋白 (Fc 標簽)

甲型流感 H5N1 (A/chicken/ Yamaguchi/7/2004) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 BRAT1 / C7orf27 基因全長ORF克隆

大鼠 NTRK2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽

Immunoprecipitation/ IP Kit - Anti-LRPAP1 Immunomagnetic Beads IP    5 mL

小鼠核轉(zhuǎn)錄因子kBP65(NFkBP65)免費代測ELISA KitRabbit Anti-human IgG/Gold  膠體金標記的兔抗人IgG 0.5ml

Ⅳ型膠原α1(COL4α1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Collagen Type IV Alpha 1 (COL4a1)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

Rabbit Anti-MK IgM/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標記的兔抗猴IgM 0.1ml

干擾素β(IFNβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Interferon Beta (IFNb)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

Rabbit Anti-pig IgG/Bio  生物素標記的兔抗豬IgG 0.1ml

防御素β2(DEFβ2)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Defensin Beta 2 (DEFb2)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

Donkey Anti-Goat IgG/Cy5.5  Cy5.5標記的驢抗羊IgG 0.1ml

白介素8(IL8)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Interleukin 8 (IL8)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

GABRA1  G1氨基A型受體α1抗體 0.1ml

巨噬細胞炎性蛋白3β(MIP3β)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Macrophage Inflammatory Protein 3 Beta (MIP3b)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

GIP  胃泌素抑制肽抗體 0.2ml

半乳凝素4(GAL4)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Galectin 4 (GAL4)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)