試劑配制:

1、酶聯(lián)板assay plate ：一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard：2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。

試劑準(zhǔn)備：
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個(gè)EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進(jìn)行30倍稀釋。

我司主營產(chǎn)品之一，產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，并經(jīng)過了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測，我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量，從而保證您的實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。產(chǎn)品供貨周期短，供貨及時(shí)，且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。

樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時(shí)應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品，請丟棄。
3. 試劑盒使用前請?jiān)谑覝鼗謴?fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測，且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染，請?jiān)谠囼?yàn)中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運(yùn)輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時(shí)，請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
2,2,2-三氟乙分子式：114.07分子量： C2H5F3N2英文名稱：2,2,2- three fCAS號：5042-30-8

2,6-二-3-氟-4-(三氟甲)吡分子式：分子量： C6H5F4N3英文名稱：2,6- two amino -3- -4- (three f) pyridineCAS號：737000-87-2

分散紅11英文名稱：Disperse red 11CAS號：2872-48-2分子式：268.27分子量： C15H12N2O3

琥酯英文名稱：ArtesunateCAS號：88495-63-0分子式：384.42082分子量：C19H28O8

溴綠英文名稱：Bromocresol greenCAS號：76-60-8分子式：698.01分子量： C21H14Br4O5S

性鉻藍(lán)K英文名稱：Acid chrome blue KCAS號：3270-25-5分子式：586.41分子量： C16H9N2Na3O12S3

酮麝香英文名稱：Ketone muskCAS號：541-91-3分子式：238.41分子量：C16H30O

2-溴-3-甲氧-4-吡甲醛分子式：216.03分子量： C7H6BrNO2英文名稱：2- -3-, -4-, formaldehydeCAS號：191418-78-7

4-甲酰咪分子式：96.09分子量： C4H4N2O英文名稱：4- aCAS號：3034-50-2

2,5-二氟甲分子式：128.12分子量： C7H6F2英文名稱：2,5- two fCAS號：452-67-5 MANF / ARMET 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

 MANF / ARMET 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

 IGSF3 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長ORF克隆

 TP63 基因全長ORF克隆

 FANCA 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆

 PKC nu / PRKD3 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽

 MMP-3 基因全長ORF克隆

 MMP-9 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽

小鼠 ASAH2 基因全長ORF克隆

 TMEM25 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

 CD74 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

 ALPL / TNAP 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體)

小鼠組蛋白H2B(H2B)博湖ELISA試劑盒關(guān)節(jié)炎相關(guān)基因 PADI4 (HL-60 PAD)(Protein-arginine deiminase type IV，PADI 4，PAD I4 ) 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:  0.5mg

臍動脈平滑肌細(xì)胞總RNA 規(guī)格:  10 μg   英文名稱：  HUASMC tRNA

血小板源性生長因子-1（抗原） PDGF-A 現(xiàn)貨供應(yīng) 規(guī)格:  0.5mg

腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞微小RNA 規(guī)格:  1 μg 2 μg 5 μg 英文名稱：  HBMEC miRNA

血小板源性生長因子-B（抗原） PDGF-B 特價(jià)促銷 規(guī)格:  0.5mg

腦血管平滑肌細(xì)胞微小RNA 規(guī)格:  1 μg 2 μg 5 μg 英文名稱：  HBCSMC miRNA

血小板源性生長因子受體-A（抗原） PDGF-R-A 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:  0.5mg

腦血管周細(xì)胞微小RNA 規(guī)格:  1 μg 2 μg 5 μg 英文名稱：  HBVP miRNA

血小板源性生長因子受體-B（抗原） PDGF-R-B 現(xiàn)貨供應(yīng) 規(guī)格:  0.5mg

脈絡(luò)叢內(nèi)皮細(xì)胞微小RNA 規(guī)格:  1 μg 2 μg 5 μg 英文名稱：  HCPEC miRNA

外周髓鞘蛋白-22多肽 PMP-22(Peripheral Myelin Protein) 特價(jià)促銷 規(guī)格:  0.5mg

脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞微小RNA 規(guī)格:  1 μg 2 μg 5 μg 英文名稱：  HCPEpiC miRNA