試劑配制:

1、酶聯(lián)板assay plate ：一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard：2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。

試劑準(zhǔn)備：
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進(jìn)行30倍稀釋。

我司主營產(chǎn)品之一，產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，并經(jīng)過了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測，我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量，從而保證您的實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。產(chǎn)品供貨周期短，供貨及時，且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。

ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品，請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測，且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染，請在試驗(yàn)中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運(yùn)輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時，請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
苜蓿中華根瘤小鼠胃細(xì)胞

C127(小鼠腺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

植物桿 Lactobacillus plantarum苜蓿中華根瘤 Sinorhizobium meliloti

CNE-2Z(鼻咽細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

亮綠瓊脂培養(yǎng)基/Brilliant Green Agar沙門氏分離培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進(jìn)口

香菇 Lentinula edodes肺炎克雷伯氏 Klebsiella pneumoniae

A3(T細(xì)胞白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

戊糖片球 Pediococcus pentosaceus金色橫裂鏈霉 Streptomyces aureosegmentosus

醋酸鹽瓊脂/乙酸鹽瓊脂/Acetate Agar細(xì)醋酸鹽試驗(yàn)250克國產(chǎn)/進(jìn)口

大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基頸上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基

食管英文名稱：KYSE510AWD 131-138 （10 mg）Imepitoin； 1-（4-chlorophenyl）-1,5-dihydro-4-（4-morpholinyl）-2H-imidazol-2-one

15（R）-Prostaglandin E2 （50 mg）9-oxo-11。alpha。，15R-dihydroxy-prosta-5Z，13E-dien-1-oic acid； 15-epi PGE2|15（R）-PGE2； 15（R）-Prostaglandin E2

CHIR1244-[（3S）-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-ylamino]-3-（1H-benzimidazol-2-yl）-6-chloro-2（1H）-quinolinone

（S）-Naproxen （1 g）（S）-6-methoxy-α-methyl-2-naphthaleneacetic acid； （S）-Naproxen

JWH 018 2’-naphthyl-N-（1-methylbutyl） isomer （10 mg）naphthalen-2-yl（1-（pentan-2-yl）-1H-indol-3-yl）methanone； JWH 018 2’-naphthyl-N-（1-methylbutyl） isomer

5-氨基改良劑 C6，TFA-保護(hù)（TFA-保護(hù)-5-氨基改良劑）5’-Amino-Modifier C6， TFA-protected

Sulfaphenazole （1 g）4-amino-N-（1-phenyl-1H-pyrazol-5-yl）-benzenesulfonamide； Depocid|Depotsulfonamide|Plisulfan|Raziosulfa； Sulfaphenazole

2-Ethylamino-1-phenylbutane （hydrochloride） （10 mg）N，α-diethyl-benzeneethanamine， monohydrochloride； 2-Ethylamino-1-phenylbutane （hydrochloride）

KN-62 （1 mg）4-[（2S）-2-[（5-isoquinolinylsulfonyl）methylamino]-3-oxo-3-（4-phenyl-1-pipeazinyl）propyl]phenyl ester， 5-isoquinolinesulfonic acid； KN-62

Nitrocefin （25 mg）Nitrocephin； （6R）-3-[（1E）-2-（2,4-dinitrophenyl）ethenyl]-8-oxo-7R-[（2-thienylacetyl）amino]-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid

BB-22 7-hydroxyquinoline isomer （5 mg）quinolin-7-yl 1-（cyclohexylmethyl）-1H-indole-3-carboxylate； BB-22 7-hydroxyquinoline isomer

YS121 （1 mg）2-[[4-chloro-6-[（2，3-dimethylphenyl）amino]-2-pyrimidinyl]thio]-octanoic acid； YS121

小鼠骨鈣素(OC)ELISA試劑盒SH-SY5Y(神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)D283 Med(腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞)

小鼠蛋白磷酸酶(PP)ELISA試劑盒 英文名稱：Mouse Protein Phosphatase,PP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T小鼠β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)ELISA Kit，48T/96T

戊糖片球 Pediococcus pentosaceus植物桿 Lactobacillus plantarum

小鼠干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長因子(SCF/MGF)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Stem cell factor/mast cell growth factor,SCF/MGF ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T兔子補(bǔ)體片斷3a(C3a)ELISA Kit，48T/96T

毛柄**(金針菇) Flammulina velutipes根瘤 Rhizobium sp.

小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體-3(VEGFR-3/Flt-4)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Vascuoar endothelial cell growth factor receptor,VEGFR-3/Flt-4 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T大鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA Kit，48T/96T

發(fā)根土壤桿 Agrobacterium rhizogenes大鼠肺成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基

小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse β2-glycoprotein 1 antibody IgA/G/M,β2-GP1 IgA/G/M ELISA Kit規(guī)格:96T/48T豬D二聚體(D2D)ELISA Kit，48T/96T