試劑配制:

1、酶聯(lián)板assay plate ：一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard：2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。

試劑準(zhǔn)備：
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個(gè)EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進(jìn)行30倍稀釋。

我司主營產(chǎn)品之一，產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，并經(jīng)過了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測(cè)，我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量，從而保證您的實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。產(chǎn)品供貨周期短，供貨及時(shí)，且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。

樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請(qǐng)不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時(shí)應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品，請(qǐng)丟棄。
3. 試劑盒使用前請(qǐng)?jiān)谑覝鼗謴?fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測(cè)，且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染，請(qǐng)?jiān)谠囼?yàn)中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運(yùn)輸過程中微量液體會(huì)沾到管壁及瓶蓋上，使用前請(qǐng)離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時(shí)，請(qǐng)用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請(qǐng)不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測(cè)均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

操作流程：
（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
小鼠胃粘膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

Hanks’ Balanced Salt Solution (with Ca2+& Mg2+)規(guī)格：500ml

普通變形桿* Proteus vulgaris大鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基

MOLT-4全細(xì)胞裂解液100μg100μggersion

大鼠氣管平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL

PANC-1全細(xì)胞裂解液NCI-N87(胃細(xì)胞)

腺細(xì)胞英文名稱：MDA-MB-468

蘇云金芽孢桿 Bacillus thuringiensis小鼠白血病克隆細(xì)胞系

肺上細(xì)胞英文名稱：L132

QGY-7703(肝細(xì)胞)中慢生華癸根瘤 Mesorhizobium huakuii

外周血嗜堿性白血病細(xì)胞英文名稱：KU8126-TMR C6馬來酰亞胺6-TMR C6 maleimide

CAY10618 （5 mg）N-[1，1’-biphenyl]-2-yl-4-（3-pyridinyl）-1H-1，2，3-triazole-1-octanamide； NMPRTase Inhibitor； CAY10618

Latanoprost ethyl amide-d4 （25 ug）N-ethyl-9α，11α，15S-trihydroxy-17-phenyl-18，19，20-trinor-prost-5Z-en-1-amide-3，3，4，4-d4； Lat-NEt-d4； Latanoprost ethyl amide-d4

GDF11 （human recombinant） （50 ug）BMP11|Growth/Differentiation Factor 11

13，14-dihydro-16，16-difluoro Prostaglandin E1 （1 mg）9-oxo-11α，15S-dihydroxy-16，16-difluoro-prostan-1-oic acid； 15-hydroxy Lubiprostone； 13，14-dihydro-16，16-difluoro Prostaglandin E1

GSK 3787 （25 mg）4-chloro-N-[2-[[5-（trifluoromethyl）-2-pyridinyl]sulfonyl]ethyl]-benzamide； GSK 3787

Swainsonine (50 mg)Tridolgosir, Swainsonine, (1S,2R,8aR)-octahydro-indolizinetriol

Exemestane （10 mg）6-methylene-androsta-1，4-diene-3，17-dione； Aromasin

特美汀（100GM）Timentin， 15:1 Ticarcillin Disodium Salt / Potassium Clavulanate Mixture

SDB-006 N-phenyl analog （5 mg）1-

（±）-Ibuprofen （1 g）（±）-α-methyl-4-（2-methylpropyl）-benzeneacetic acid； Motrin； （±）-Ibuprofen

BW 246C （1 mg）（4R）-（3-[（3R，S）-3-cyclohexyl-3-hydroxypropyl]-2，5-dioxo）-4-imidazolidineheptanoic acid； 8-epi BW 245C； BW 246C

小鼠谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶θ1(GSTθ1)免費(fèi)代測(cè)ELISA KitSDS-PAGE濃膠緩沖液(4x)植物桿 Lactobacillus plantarum

小鼠小扁豆素結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體2(AFP-L2)ELISA試劑盒 英文名稱：Mouse alpha-fetoprotein Lens culinaris agglutiin 2,AFP-L2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T維生素D2(VD2)ELISA Kit，48T/96T 進(jìn)口/原裝

戊糖桿 Lactobacillus pentosus根瘤 Rhizobium sp.

小鼠堿性磷酸酶(ALP)ELISA試劑盒 英文名稱：Mouse alkaline phosphatase,ALP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T抗中性粒/中心體抗體(ACA)ELISA Kit，48T/96T

毛柄**(金針菇) Flammulina velutipes大鼠腸動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基

小鼠硫氧還蛋白還原酶(TrxR)ELISA試劑盒 英文名稱：Mouse thioredoxin reductase,TrxR ELISA Kit規(guī)格:96T/48T大鼠β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)ELISA Kit，48T/96T

大豆慢生根瘤 Bradyrhizobium japonicum宇佐美曲霉 Aspergillus usamii

小鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Stromal cell derived factor 1β,SDF-1β ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T補(bǔ)體片斷5a(C5a)ELISA Kit，48T/96T

木瓜蛋白酶(含10mL酶解緩沖液)銹球 Sparassis crispa

小鼠補(bǔ)體蛋白4(C4)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Complement 4,C4 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T犬雙氫睪酮(DHT)ELISA Kit，48T/96T

泡盛曲霉 Aspergillus awamori小鼠白血病細(xì)胞

小鼠T細(xì)胞活化連接蛋白(LAT)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Linker for activation of T cell,LAT ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T絨毛膜促性腺β(β-HCG)ELISA Kit，48T/96T