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操作流程:
(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
我司主營(yíng)產(chǎn)品之一,產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn),并經(jīng)過了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測(cè),我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量,從而保證您的實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。產(chǎn)品供貨周期短,供貨及時(shí),且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。
產(chǎn)品名稱 |
小鼠谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶α1(GSTα1)ELISA試劑盒 |
英文名稱 |
Mouse Glutathione S Transferase Alpha 1(GSTa1)ELISA Kit |
貨號(hào) |
PM105406 |
試劑配制:
1、酶聯(lián)板assay plate :一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard:2瓶?jī)龈善贰?br>
3、樣品稀釋液sample diluent:1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent:1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent:1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody:1×120μl/瓶1:100
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin:1×120μl/瓶1:100
8、底物溶液tmb e:1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer:1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution:1×10ml/瓶2n h2so4。
試劑準(zhǔn)備:
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC),試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管,每個(gè)EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度, 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液:用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL,進(jìn)行30倍稀釋。
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
注意事項(xiàng):
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,請(qǐng)不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時(shí)應(yīng)保存在 2-8℃冰箱,已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品,請(qǐng)丟棄。
3. 試劑盒使用前請(qǐng)?jiān)谑覝鼗謴?fù) 30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測(cè),且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染,請(qǐng)?jiān)谠囼?yàn)中使用 1 次性試管,槍頭,封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,在運(yùn)輸過程中微量液體會(huì)沾到管壁及瓶蓋上,使用前請(qǐng)離心處理(5-10 S 即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時(shí),請(qǐng)用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請(qǐng)不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確,每次檢測(cè)均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
1640培養(yǎng)基/1640 Medium/RPMI 1640含L-谷氨酰胺,不含碳酸氫鈉10升國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
球孢白僵 Beauveria bassiana根瘤
CHO/中華倉鼠卵巢細(xì)胞株國(guó)產(chǎn)
Caov-3(突狀卵巢腺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
Caki-1(腎透細(xì)胞細(xì)胞)小鼠肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞完全培養(yǎng)基
Skirrow瓊脂配套試劑 規(guī)格: 10支/盒 用途: 每支添加于100mL的 Skirrow瓊脂基礎(chǔ)中
鼠李糖桿 Lactobacillus rhamnosus黑木耳 Auricularia auricula
Vero(非洲綠猴腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae酸球亞種 Lactococcus lactis subsp. lactis
TMB底物顯色試劑盒(沉淀型)100ml國(guó)產(chǎn)
5%糖發(fā)酵管/5% Lactose Ferment Broth糖遲發(fā)酵種的鑒別250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口EDANS標(biāo)記的Asp天冬氨FMOC-Asp(EDANS)-OH
單基化組蛋白H3K36多肽Monomethyl Histone H3K36 Peptide (100 ul)
Nimesulide (25 g)N-(4-nitro-2-phenoxyphenyl)-methanesulfonamide; R805; Nimesulide
Ac-Leu-Leu-arginal, hemisulfate, Ac-Leu-Leu-ArginalLeupeptin, hemisulfate (Microbial)
Dihomo-γ-Linolenoyl Ethanolamide (10 mg)N-(2-hydroxyethyl)-8Z,11Z,14Z-eicosatrienamide; Dihomo-γ-Linolenoyl Ethanolamide
Colorimetric Substrate (1 ea)Colorimetric Substrate
[VO(Hhpic-O,O) (Hhpic-O,N)(HVO-OHpic, Trihydrate
CAY10618 (1 mg)N-[1,1’-biphenyl]-2-yl-4-(3-pyridinyl)-1H-1,2,3-triazole-1-octanamide; NMPRTase Inhibitor; CAY10618
Rottlerin (50 mg)(2E)-1-[6-[(3-acetyl-2,4,6-trihydroxy-5-methylphenyl)methyl]-5,7-dihydroxy-2,2-dimethyl-2H-1-benzopyran-8-yl]-3-phenyl-2-propen-1-one; Mallotoxin|NSC 94525|NSC 56346; Rottlerin
2-(diphenylamino)-N-(7-(hydroxyamino)-7-oxoheptyl)pyrimidine-5-carboxamideACY-1215
2-Arachidonoyl Glycerol-d5 (100 ug)5Z,8Z,11Z,14Z-eicosatetraenoic acid, 2-glycerol-1,1,2,3,3-d5 ester; 2-AG-d5; 2-Arachidonoyl Glycerol-d5
1-NBD-decanoyl-2-decanoyl-sn-Glycerol (5 mg)1-NBD-1,2-bis(O-decanoyl-sn-glycerol); 1-NBD-decanoyl-2-decanoyl-sn-Glycerol
小鼠谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶α1(GSTα1)ELISA試劑盒酒酵母 Saccharomyces cerevisiaeHEC-1A, 內(nèi)膜細(xì)胞系
大鼠膀胱腫瘤抗原(BTA)ELISA試劑盒英文名稱:Rat Bladder tumor antigen,BTA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T兔子白血病抑制因子受體(LIFR)ELISA Kit,48T/96T
涇陽鏈霉 Streptomyces jingyangensis釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
大鼠細(xì)胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA試劑盒英文名稱:Rat lymphotactin,Lptn/LTN ELISA Kit規(guī)格:96T/48T小鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA Kit,48T/96T
PC-3M-2B4(前列腺低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株)宇佐美曲霉 Aspergillus usamii
大鼠過敏/補(bǔ)體片斷4a(C4a)ELISA試劑盒英文名稱:t Complement fragment 4a,C4a ELISA Kit規(guī)格:96T/48T小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)ELISA Kit,48T/96T
植物桿 Lactobacillus plantarum大鼠膀胱平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基
大鼠抗IVIgG抗體ELISA試劑盒英文名稱:Rat anti-IVIgG antibody ELISA Kit規(guī)格:96T/48T兔子催乳素(PRL)ELISA Kit,48T/96T
苜蓿中華根瘤 Sirhizobium meliloti酸球亞種 Lactococcus lactis subsp.lactis
大鼠抗凝血酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISA試劑盒英文名稱:Rat Anti-Thrombin Ⅲ,AT-Ⅲ ELISA Kit規(guī)格:96T/48T大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISA Kit,48T/96T
NIH/3T3, 小鼠成纖維細(xì)胞系檸檬綠木霉
大鼠球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒英文名稱:Rat Immuglobulin E,IgE ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T小鼠乙型肝炎表面抗體(HBsAb)ELISA Kit,48T/96T