咨詢電話：18117197628
細胞接收后的處理：
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號
RPMI-7951（
1×106
P-X9201
產(chǎn)品詳情：
種屬來源；人
性別年齡；女性，18歲
組織來源；皮膚
生長特性；貼壁生長
細胞形態(tài)；上皮樣
細胞規(guī)格；1 X 106cells/T25或1 mL凍存管
培養(yǎng)條件；EMEM + 10% FBS，37 ℃, 5% CO2
凍存條件；90% FBS + 10% DMSO
傳代方法；1:3傳代, 2-3天傳1代
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
1）準備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細胞處理：
1）凍存細胞的復蘇：：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
|
角蛋白KRT83抗體 |
石蠟切片組織PP2A蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒 |
|
KRT83 |
豚鼠白介素5(IL5)elisa檢測試劑盒 |
|
細胞核酸結(jié)合蛋白抗體 |
體液HPV7（HUMAN PAPILLOMAVIRUS-7）病毒定性檢測試劑盒 |
|
CNBP/ZNF9 |
大鼠熱休克蛋白90-alpha(Hsp90aa1/Hsp86/Hspca)elisa檢測試劑盒 |
|
轉(zhuǎn)化生長因子β1抗體 Anti-TGF Beta 1/2/3 |
蔗糖磷酸化酶(SP)測試盒 |
|
核糖核酸酶抑制因子1抗體 Anti-Ribonuclease Inhibitor |
腺苷A1A受體抗體 ADORA1 |
|
神經(jīng)激肽B抗體 Anti-NKB |
心臟特異性絲氨酸蛋白酶抗體 Corin |
|
血管活性腸肽受體-1抗體 Anti-VIP Receptor 1/VAPC1 |
白介素31受體a抗體 IL31RA |
|
磷酸化叉頭蛋白家族1(Ser319)抗體 Phospho-FoxO1 (Ser319) |
胞環(huán)蛋白肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體 Anillin |
|
豬胃蛋白酶抗體 Pepsin A |
CD5抗體 CD5 |
|
轉(zhuǎn)錄因子LMCD1抗體 LMCD1 |
C端結(jié)合蛋白1抗體 CTBP1 |
|
光導蛋白樣蛋白PDCL抗體 PHLP |
磷酸化FANCD2抗體 phospho-FANCD2 (Ser222) |
|
核呼吸因子-1抗體 NRF1 |
NMDA受體調(diào)節(jié)1樣蛋白抗體 NARG1L |
|
myc蛋白抗體 Myc |
RPMI-7951（人惡性黑色素瘤細胞溶質(zhì)載體轉(zhuǎn)運蛋白家族35成員D3抗體 SLC35D3 |
|
神經(jīng)細胞PAS結(jié)構域蛋白2抗體 NPAS2 |
細胞CDK3/CYCLIN E激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C） |
|
人蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)elisa分析檢測試劑盒 |
小鼠全段甲狀旁腺素(i-PTH)elisa檢測試劑盒 |
實驗步驟：
1 將目的基因構建到合適的慢病毒載體上，利用293T細胞進行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進行細胞鋪板，轉(zhuǎn)染時細胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系。