咨詢電話：18117197628
小鼠成纖維細(xì)胞+LUC;L929-LUC-GFP-PURO
英文簡稱
規(guī)格
貨號
L929-LUC
1×106
P-X11271
產(chǎn)品詳情：
細(xì)胞別稱；L929-LUC；小鼠成纖維細(xì)胞-LUC；小鼠成纖維細(xì)胞-綠色熒光蛋白
種屬來源；小鼠
組織來源；皮下結(jié)締組織
生長特性；貼壁生長
細(xì)胞形態(tài)；成纖維細(xì)胞
細(xì)胞代數(shù)；10代以內(nèi)
背景簡介；Luciferase L929細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)螢光蛋白。該細(xì)胞株性狀穩(wěn)定，培養(yǎng)時不需要添加維持?？捎米魑灩獾鞍谆钚詸z測中的陽性對照，也可用于活體動物成像實(shí)驗(yàn)。該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。1948年三月建立了NCTC clone 929(小鼠結(jié)締組織)，細(xì)胞系L的克隆。細(xì)胞系L是早建立的連續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞系之一，而clone 929是早的克隆株。從一只100日齡的雄性C3H/An小鼠的正常皮下疏松結(jié)締組織入脂肪組織中建立了親本細(xì)胞系L。 第95代的細(xì)胞系L使用毛細(xì)管法分離單細(xì)胞建立了clone929。檢測發(fā)現(xiàn)鼠痘病毒陰性。
生物等級；1
細(xì)胞規(guī)格；1x106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測；無
保藏機(jī)構(gòu)；ATCC; CCL-1 ATCC; CRL-6364 BCRC; 60091 BCRJ; 0188 DSMZ; ACC-2 ECACC; 85011425 ECACC; 85103115 ECACC; 88102702
培養(yǎng)基；90%MEM+10%FBS+PS+1.0ug/ml puro
培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件；無血清凍存液，液氮儲存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。
公司正在出售的產(chǎn)品：
|
腦特異性跨膜蛋白抗體 |
大鼠表睪酮(ET)elisa檢測試劑盒 |
|
NETO2 |
線粒體復(fù)合物IV蛋白共沉淀分析試劑盒 |
|
生長分化因子1抗體 |
大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)elisa檢測試劑盒 |
|
GDF1 |
小鼠白介素23（IL－23）elisa檢測試劑盒 |
|
蛋白電泳預(yù)制膠4-15%，10孔 10塊/盒 |
組織生物化學(xué)成分定量檢測試劑專題 |
|
植物細(xì)胞可溶性總核蛋白粗提制備試劑盒 |
味覺2受體成員41抗體 T2R41 |
|
核酸氧化8-氧脫氧鳥苷（8-oxo-dG）高效液相色譜（HPLC）分析試劑盒 |
細(xì)胞骨架連接質(zhì)膜蛋白抗體 EBP50 |
|
含碳酸氫鈉，含酚紅 |
SRC有絲分裂相關(guān)蛋白68抗體 SAM68 |
|
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白125抗體 CCDC125 |
TRIM42蛋白抗體 TRIM42 |
|
原鈣粘蛋白γA12抗體 PCDHGA12 |
AF680標(biāo)記的上皮鈣粘附分子抗體 E cadherin, Alexa Fluor 680 conjugated |
|
粘蛋白-2/上皮膜抗原2重組兔單克隆抗體 MUC2 |
AF750標(biāo)記的原纖維蛋白1抗體 Fibrillin 1, Alexa Fluor 750 conjugated |
|
分泌型磷脂酶A2抗體 Secretory phospholipase A2 |
緊密連接蛋白25抗體 CLDN25 |
|
富含脯氨酸蛋白15抗體 PRR15 |
HRP標(biāo)記的堿性成纖維細(xì)胞生長因子單克隆抗體 FGF2, HRP conjugated |
|
G蛋白偶聯(lián)受體γ3抗體 G gamma3 |
小鼠成纖維細(xì)胞+LUC;L929-LUC-GFP-PURO凝血酶原抗體 Gamma Thrombin |
|
丘腦分泌素受體1+2/食欲素受體1+2抗體 Orexin receptor 1+2 |
大鼠神經(jīng)元正五聚蛋白Ⅱ(NPTX2)elisa檢測試劑盒 |
|
通用型酵母樣品細(xì)胞周期G1/S和G2/M期步（SYNCHRONY）處理試劑盒 |
果蠅萃取物制備試劑盒 |