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英文簡稱
規(guī)格
貨號
KURAMOCHI
1×106
P-X9493
產品詳情:
細胞別稱;KURAMOCHI;人卵巢癌細胞
種屬來源;人
組織來源;腹水
生長特性;貼壁生長
細胞形態(tài);表皮細胞樣
細胞代數(shù);10代以內
細胞規(guī)格;1x106cells/T25或1mL凍存管
支原體檢測;無
倍時間;~30小時
培養(yǎng)基;1640+10% FBS+PS
培養(yǎng)條件;氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
凍存條件;無血清凍存液,液氮儲存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理:
1)收到細胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備DMEM培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細胞處理:
1)凍存細胞的復蘇::將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:1、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3)細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例:
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理:
實驗步驟:
1 將目的基因構建到合適的慢病毒載體上,利用293T細胞進行慢病毒包裝,獲得含目的基因的慢病毒;
2 轉染前24 h進行細胞鋪板,轉染時細胞密度控制在80%左右;
3 天加入適量病毒懸液感染細胞,并置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育;
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基,并繼續(xù)培養(yǎng);
5 在轉染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng),直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%,獲得穩(wěn)轉細胞系。
公司正在出售的產品:
NEFA相互作用核蛋白NIP30抗體 |
5-HETE檢測試劑盒 |
NIP30 |
APC5 |
溶酶體累積病相關蛋白/口吃相關蛋白抗體 |
細胞分裂周期蛋白5抗體 |
GNPTAB |
HOXD9 |
血液D-乳酸比色法定量檢測試劑盒 |
轉錄調節(jié)因子HOXD9抗體 |
人Podocin elisa檢測試劑盒 |
膜相關蛋白17抗體 |
大鼠β2整合素(ITG β2/CD11+CD18)elisa檢測試劑盒 |
MAP17 |
小鼠腎上腺素能a1A受體(ADRA1A)elisa分析檢測試劑盒 |
脫氧核糖磷酸醛縮酶樣抗體 |
糖類應答元件結合蛋白ChREBP抗體 Anti-WBSCR14/ChREBP |
DERA |
TGFB1誘導抗凋亡因子1抗體 |
SEL1L抗體 Anti-SEL1L |
TIAF1 |
環(huán)指蛋白166抗體 Anti-RNF166 |
線粒體類核因子1/乳腺癌相關蛋白SGA-81M抗體 |
間變性瘤激酶核相互作用伴侶蛋白抗體 Anti-NIPA |
MNF1 |
多聚合酶α抗體 Anti-PAPOA |
抑制Hh信號通路蛋白SUFU抗體 Anti-SUFU/Suppressor of Fused |
KURAMOCHI人卵巢癌細胞磷酯酶Cγ1抗體 Anti-PLCG 1/PLC gamma 1 |
腫瘤壞死因子α誘導相互作用蛋白3抗體 Anti-TNFAIP3 interacting protein 3/ABIN3 |
Pig IgG / FITC |
FITC標記豬IgG |
基因抑制元件1抗體 |