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細(xì)胞接收后的處理：
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號
y79
1×106
P-X9322
產(chǎn)品詳情：
細(xì)胞別稱；y79；人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞
種屬來源；人
組織來源；視網(wǎng)膜
生長特性；懸浮生長
細(xì)胞形態(tài)；圓形、成簇細(xì)胞樣
細(xì)胞代數(shù)；10代以內(nèi)
背景簡介；1971年1月，該細(xì)胞由Reid TW及其同事從病人右眼切除的腫瘤進(jìn)行原代培養(yǎng)建立而成，此病人有很強(qiáng)的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的母系家族遺傳性。該細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，如核膜內(nèi)折、三層膜結(jié)構(gòu)、大的被膜小泡、環(huán)孔板、微管、中心粒、基粒等都與原始腫瘤相似。
細(xì)胞規(guī)格；1x106cells/T25或1mL凍存
支原體檢測；無
培養(yǎng)基；RPMI-1640+20% FBS+PS
培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件；無血清凍存液，液氮儲存
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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猴可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM-1)elisa生化檢測試劑盒 |
腺苷脫氨酶EC 3.5.4.4 1 KU/瓶 |
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sICAM-1 ELISA Kit |
藥品糖精（saccharin）含量紅外光譜法定量檢測試劑盒 |
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人泛素結(jié)合酶E2D1（UBC4/ 5的同源物，酵母）(UBE2D1)elisa生化檢測試劑盒 |
豚鼠α干擾素(IFN-α)elisa分析檢測試劑盒 |
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UBE2D1ELISAkit |
植物培養(yǎng)細(xì)胞DNA損傷彗星熒光檢測試劑盒 |
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豚鼠干擾素γ(IFNγ)elisa檢測試劑盒 |
大鼠生長釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)elisa檢測試劑盒 |
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半胱-3（CASPASE-3） |
通用轉(zhuǎn)錄因子3C多肽3/TFIIIC102抗體 GTF3C3/TFIIIC102 |
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細(xì)胞超氧化物陰離子化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒 |
突觸素樣蛋白1抗體 Pantophysin |
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谷氨酰胺合成酶（GS)測試盒 |
RET指蛋白樣2/3抗體 RFPL2+RFPL3 |
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間充質(zhì)干細(xì)胞蛋白DSC54抗體 PRR16/DSC54 |
S100鈣結(jié)合蛋白A8單克隆抗體 S100A8 |
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胰島素降解酶單克隆抗體 IDE |
5-羥色胺受體3抗體 5-HTR3 |
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乙?；嚢彼?span>/乙?；嚢彼釂慰寺】贵w Acetylated Lysine |
9號染色體開放閱讀框25抗體 C9orf25 |
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多巴胺受體D5抗體 Dopamine D5 receptor |
甲基化多聚腺苷酸結(jié)合蛋白抗體 PABP (Methyl Arg455/460) |
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翻譯延伸因子EF-1a重組兔單克隆抗體 EEF1A1 |
GTP酶IMAP家族成員3抗體 GIMAP3 |
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FOXN4蛋白抗體 FOXN4 |
Y-79人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞膜蛋白EVC2抗體 EVC2 |
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帕金蛋白抗體 Parkin |
人高分子量細(xì)胞角蛋白(CK-HMW)elisa分析檢測試劑盒 |
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氧化酶定性檢測試劑盒 |
大鼠胱天蛋白酶9(CASP9)elisa檢測試劑盒 |
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。