運(yùn)輸和保存：

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

KYSE-410人食管鱗癌細(xì)胞

英文名稱	KYSE-410	產(chǎn)品形態(tài)	上皮細(xì)胞樣 貼壁細(xì)胞
貨號	P-X10451	產(chǎn)品分類	人細(xì)胞系
規(guī)格	1×106	包裝	株
來源	食管鱗癌	用途	僅供科研研究使用

細(xì)胞特性：

生長特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

生長培養(yǎng)基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

推薦傳代比例 1:4-1:6

推薦換液頻率 2~3次/周

背景描述 Established from the poorly differentiated invasive esophageal squamous cell carcinoma resected from the cervical esophagus of a 51-year-old Japanese man prior to treatment (tumor invasion into the adventitia was obvious); described in the literature to overexpress hst-1 (= heparin-binding growth factor) and cyclin D1

年齡（性別） 女；51歲

組織來源 食管鱗癌

細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞

腫瘤類型 食管癌細(xì)胞

生物等級 1

倍增時(shí)間 ~32-45 hours

保藏機(jī)構(gòu) DSMZ; ACC-381 ECACC; 94072023 JCRB; JCRB1419

細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。                      
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備MEM（推薦iCell-0012）培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1 mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 4 mL 培養(yǎng)基混 合均勻。在 1000 rpm 條件下離心 3 min，棄去上清液，加 1-2 mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有 細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜 (或?qū)⒓?xì)胞懸液加入 6 cm 皿中，加入約 4 mL 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜) 。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
b、加 1 mL 消化液 (0.25%Trypsin-0.53mM EDTA) 于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去 消化液，將培養(yǎng)瓶置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1 -3min (視細(xì)胞消化情況而定) ，然后在顯微鏡下 觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        。
c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞，裝入無菌離心管中，1000 rpm 條件下離心 4 min，棄去上清液， 用 PBS 清洗一遍，棄盡 PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度 5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍 存管凍存 1mL 細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h 后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

公司正在出售的產(chǎn)品：

角蛋白相關(guān)蛋白20.4抗體	磷酸化Rho相關(guān)蛋白激酶2抗體 phospho-ROCK2 (Tyr256)
KAP20.4	線粒體二羧酸載體蛋白11抗體 SLC25A11
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白127抗體	CD81重組兔單克隆抗體 TAPA1/CD81
CCDC127	B細(xì)胞轉(zhuǎn)錄激活因子抗體 BATF
腺苷酸琥珀酸裂解酶抗體 Adenylosuccinate Lyase	磷酸化二氫嘧啶酶樣2(CRMP2/DPYL2)抗體 Phospho-CRMP2 (Thr509)
癌基因ETS2抗體 ETS2	神經(jīng)激肽U抗體 Neuromedin U
白細(xì)胞共抗原CD45抗體 CD45	MCART2蛋白抗體 MCART2
軟骨基質(zhì)相關(guān)蛋白UCMA抗體 UCMA	NAD(P)H 苯醌脫氫酶 2抗體 NQO2
α酮戊二酸脫氫酶（α-KGDH）測試盒	腫瘤轉(zhuǎn)移抑制蛋白1抗體 CD82
小鼠丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）elisa檢測試劑盒	轉(zhuǎn)導(dǎo)素β1X連鎖蛋白抗體 TBL1X/SMAP55
線粒體呼吸鏈復(fù)合物 Ⅲ 活性測試盒 20管/10樣 生化法	谷氨酸受體紅藻氨酸離子2/谷氨酸受體6抗體 GRIK2
寡核苷酸探針非位素化學(xué)發(fā)光法DNA斑點(diǎn)雜交完全試劑盒	核仁磷酸蛋白3抗體 Nucleoplasmin 3
小鼠鐵蛋白（Ferritin）elisa檢測試劑盒	細(xì)胞磷酸二酯酶4（PDE4）活性酶連續(xù)循環(huán)光譜法定量檢測試劑盒
大鼠角蛋白18(KRT18)elisa檢測試劑盒	KYSE-410人食管鱗癌細(xì)胞人神經(jīng)激肽A（OPG）elisa檢測試劑盒
犬脂肪酸結(jié)合蛋白elisa檢測試劑盒	小鼠角化細(xì)胞因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)elisa檢測試劑盒
細(xì)胞脊髓過氧化酶（MPO）活性高質(zhì)敏感比色法定量檢測試劑盒	大鼠雌酮(E1)elisa分析檢測試劑盒

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng):

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。 
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。 
3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。 
4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，，用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。 
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。 
6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 
7. 該細(xì)胞僅供科研使用。 
8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議 1：2 傳代 。 
9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。