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英文簡(jiǎn)稱
規(guī)格
貨號(hào)
SUP-b15
1×106
P-X10488
產(chǎn)品詳情：
細(xì)胞別稱；Sup-B15; SUPB-15; SUPB15; SupB15; SupB15W; SupB15WT
種屬來源；人
年齡性別；8歲
組織來源；骨髓；急性母細(xì)胞白血病；B 母細(xì)胞
生長特性；懸浮生長
細(xì)胞形態(tài)；母細(xì)胞樣
細(xì)胞代數(shù)；10代以內(nèi)
背景介紹；這株細(xì)胞來源于一位B細(xì)胞全部為費(fèi)城染色體陽性的8歲小孩的骨髓。這些細(xì)胞表達(dá)多個(gè)B細(xì)胞標(biāo)記，但不表達(dá)T細(xì)胞標(biāo)記。β-2 微球蛋白，Leu12，My7 (CD13), OKT9 (CD71), OKT10 (CD38) 及 CALLA (CD10)抗體陽性。CB1, Leu 1 (CD5), Leu2 (CD8), Leu3 (CD4), Leu4 (CD3), Leu5 (CD2), Leu6 (CD1a), Leu9, Leu M1 (CD15), My9 (CD33), 表面抗原 (sIg -) 及 Epstein-Barr 病毒陰性。
生物等級(jí)；1
細(xì)胞規(guī)格；1x106cells/T25或1mL凍存管
支原體檢測(cè)；無
保藏機(jī)構(gòu)；ATCC; CRL-1929 DSMZ; ACC-389
培養(yǎng)基；IMDM+20%FBS+1%PS
培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件；無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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人β-防御素3 elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
綿羊5羥色胺/血清素/血清胺(5HT/ST)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
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血液組織B（CATHEPSIN B）活性熒光定量檢測(cè)試劑盒 |
異檸檬酸脫氫酶3 beta亞基抗體 |
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小鼠卵磷脂膽固醇脂酰轉(zhuǎn)移酶(LCAT)elisa檢測(cè)試劑盒 |
熱休克因子結(jié)合蛋白1抗體 |
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大鼠肝腎骨堿性磷酸酶(ALPL)elisa檢測(cè)試劑盒 |
PHKA1 |
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IDH3B |
磷酸激酶α1抗體 |
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藍(lán)色敏感的視色素 (厚皮螺旋體) 抗體 |
PBS緩沖液 500ml |
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blue-sensitive visual pigment |
細(xì)胞TRAIL 蛋白表達(dá)比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
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小鼠V-Myc骨髓細(xì)胞瘤病毒癌基因同源物(MYC)elisa檢測(cè)試劑盒 |
HSBP1 |
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Cy3標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG H&L |
凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白ASC抗體 Anti-TMS1/ASC |
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Donkey Anti-Guinea Pig IgG H&L / Cy3 |
三磷酸腺苷受體受體P2X1抗體 Anti-P2RX1 |
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8號(hào)染色體開放閱讀框52抗體 |
缺陷性分配同源物α抗體 Anti-PAR6 |
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FLJ20530/C8orf52 |
Smad核轉(zhuǎn)錄共抑制因子抗體 Anti-SnoN |
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人1,5-脫水葡萄糖醇/1,5-脫水山梨(1,5-AG)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
小鼠甲狀腺素抗體(TAb)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
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5-AG)ELISAKit |
人Ph+急淋白血病細(xì)胞系;SUP-b15TAbELISAKit |
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大鼠2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
人鈣蛋白酶抑素抗體(ACAST-DⅣ)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
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3-DPG ELISA Kit |
HumanACAST-DⅣELISAKit |