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英文簡(jiǎn)稱
規(guī)格
貨號(hào)
HTR-8
1×106
P-X10497
產(chǎn)品詳情：
細(xì)胞別稱；HTR-8/Svneo ；人胚胎滋養(yǎng)細(xì)胞
種屬來源；人
組織來源；妊娠 6 至 12 周 胎盤組織
生長(zhǎng)特性；貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài)；上皮細(xì)胞和間充質(zhì)樣細(xì)胞群
細(xì)胞代數(shù)；10代以內(nèi)
背景簡(jiǎn)介；HTR-8/SVneo細(xì)胞是通過用編碼猿病毒 40 大 T 抗原的基因轉(zhuǎn)染從人類妊娠早期胎盤絨毛外植體中生長(zhǎng)出來的細(xì)胞而獲得的。這些細(xì)胞在原位表現(xiàn)出絨毛外侵襲性滋養(yǎng)層細(xì)胞的多種標(biāo)志物：胰島素樣生長(zhǎng)因子 (IGF)-II、NDOG-5、增殖細(xì)胞核抗原 (PCNA)、人白細(xì)胞抗原框架抗原 (W6/32) 和一組獨(dú)特的整聯(lián)蛋白，包括 alpha 1、alpha 3、alpha 5、alpha v 和 beta 1 亞基以及 alpha v beta 3/beta 5 玻連蛋白受體。它們是負(fù)性巨噬細(xì)胞標(biāo)記 63/D3、內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記因子 VIII 以及 α6 和 β4 整合素亞基。HTR-8/SVneo 細(xì)胞可用于研究滋養(yǎng)層和胎盤生物學(xué)。注意：HTR-8/SVneo細(xì)胞系已被證明包含上皮細(xì)胞和間充質(zhì)樣細(xì)胞群。
細(xì)胞規(guī)格；1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測(cè)；無
培養(yǎng)基；1640+10% FBS+1%PS
培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件；無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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果菜碳水化合物比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
組織蛋白磷酸酶2A （PP2A）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
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脲酶（UE）測(cè)試盒 |
JNK/ SAPK抑制激酶抗體 |
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大鼠內(nèi)皮脂肪酶(EL)elisa檢測(cè)試劑盒 |
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子樣蛋白1抗體 |
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血清樣品樹脂法去內(nèi)試劑盒 |
RBM26 |
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JIK/TAOK3 |
RNA結(jié)合蛋白26抗體 |
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羧肽酶CPO抗體 |
小鼠胎球蛋白A(Fetuin A)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
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Carboxypeptidase O |
人Toll樣受體6(TLR6)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
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大鼠白蛋白elisa檢測(cè)試劑盒 |
KGFLP1 |
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Cy5.5標(biāo)記的羊抗小鼠IgG H&L |
等上游刺激因子1抗體 Anti-USF-1 |
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Goat Anti-Mouse IgG H&L / Cy5.5 |
原鈣粘蛋白γA2抗體 Anti-PCDHGA2 |
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G0/G1期開關(guān)調(diào)節(jié)蛋白2抗體 |
原鈣粘附蛋白α8抗體 Anti-PCDHA8 |
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G1switch 2 |
尿酸酶 Anti-Uricase |
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牛生長(zhǎng)抑素(SS)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
小鼠分泌型磷脂酶A2(sPLA2)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
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SS ELISA Kit |
人滋養(yǎng)細(xì)胞；HTR-8sPLA2ELISAKit |
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驢雌二醇(E2)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
人的牛血清白蛋白(BSA)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
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E2 ELISA Kit |
BSAELISAkit |