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細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號
WI-38
1×106
P-X10500
產(chǎn)品詳情：
細(xì)胞別稱；Wi-38; WI 38; WI38; Wistar Institute-38; AG06814-J; AG06814-M; AG06814-N；人胚肺成纖維細(xì)胞
種屬來源；人
年齡性別；女
組織來源；正常肺
生長特性；貼壁生長
細(xì)胞形態(tài)；成纖維細(xì)胞
細(xì)胞代數(shù)；10代以內(nèi)
背景介紹；WI-38人二倍體細(xì)胞系來自妊娠3個月的正常胚胎肺組織。該細(xì)胞系是首株用于人類疫苗制備的人二倍體細(xì)胞系。培養(yǎng)液中添加TNF alpha可以促進(jìn)細(xì)胞生長。
STR位點；Amelogenin：X；CSF1PO：10，12；D13S317：11；D16S539：11，12；D18S51：16，18；D19S433：13，16.2；D21S11：30，30.2；D2S1338：19，25；D3S1358：16，17；D5S818：10；D7S820：9，11；D8S1179：14；FGA：22，24；TH01：8，9.3；TPOX：8；vWA：19，20；
生物等級；1
細(xì)胞規(guī)格；1x106cells/T25或1mL凍存管
支原體檢測；無
保藏機(jī)構(gòu)；ATCC; CCL-75 ATCC; CRL-7728 ECACC; 90020107
培養(yǎng)基；MEM+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件；無血清凍存液，液氮儲存
干冰運輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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α-葡萄糖苷酶（α - GC）測試盒 |
NAD-蘋果酸脫氫酶（NAD-MDH）測試盒 |
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小鼠甲狀腺素抗體(TAb)elisa檢測試劑盒免費代測 |
KCNH3蛋白抗體 |
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DAB顯色試劑盒50ml |
驅(qū)動蛋白家族成員24抗體 |
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組織還原型甘肽（GSH）濃度高效液相色譜定量檢測試劑盒 |
RNF14 |
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KCNH3 |
環(huán)指蛋白14抗體 |
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細(xì)胞分裂周期2樣蛋白激酶5抗體 |
載玻片細(xì)胞CASPASE-6蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒 |
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CDC2L5 |
小鼠Toll樣受體7(TLR7)elisa檢測試劑盒 |
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大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白6(IGFBP-6)elisa檢測試劑盒 |
KIF24 |
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膠體金標(biāo)記的兔抗雞IgM |
T細(xì)胞激活蛋白抗體 Anti-Sca1/Ly6A/E |
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Rabbit Anti-Chicken IgM / Gold |
石骨癥相關(guān)蛋白PLEKHM1抗體 Anti-PLEKHM1 |
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多肽N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶1抗體 |
蛋白酶激活受體4抗體 Anti-PAR4 |
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GALNT1 |
泛素蛋白連接酶E1抗體 Anti-UBCH6/UBE2E1 |
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綿羊催產(chǎn)素(OT)elisa生化檢測試劑盒 |
小鼠蛋白聚糖4(PRG4)elisa生化檢測試劑盒 |
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OT ELISA Kit |
人胚肺成纖維細(xì)胞；WI-38 (STR)PRG4ELISAKit |
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甲型流感H3N2 HA elisa生化檢測試劑盒 |
人彈性蛋白(ELN)elisa生化檢測試劑盒 |
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Influenza A H3N2 HA ELISA Kit |
ELNELISAKit |
實驗步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。