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細胞接收后的處理:
1)收到細胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。
LOVO+LUC人結(jié)直腸癌細胞熒光素酶標(biāo)記
英文簡稱
規(guī)格
貨號
LOVO+LUC:LOVOLUC
1×106
P-X825
產(chǎn)品詳情:
細胞介紹
該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。
細胞特性
1) 來源:結(jié)直腸腺癌
2) 形態(tài):上皮細胞樣,貼壁生長
3) 含量:>1×10? 細胞數(shù)
4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途:僅供科研使用。
干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細胞處理:
1)凍存細胞的復(fù)蘇::將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:1、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當(dāng)延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3)細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例:
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理:
公司正在出售的產(chǎn)品:
OSTC蛋白抗體 |
鋅指蛋白99抗體 ZNF99 |
OSTC |
ENPP4蛋白抗體 ENPP4 |
鈣離子通道a1F亞型抗體 |
蛋白O巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶1抗體 POFUT1 |
CACNA1F |
促甲狀腺素受體抗體 TSHR |
FAM210B蛋白抗體 FAM210B |
雄受體抗體 Androgen receptor |
磷酸化天冬氨酰氨基肽酶(S109)抗體 phospho-DNPEP (Ser109) |
1號染色體開放閱讀框54抗體 C1orf54 |
磷酸化真核翻譯起始因子4B抗體 phospho-EIF4B (Ser406) |
環(huán)指蛋白21抗體 RNF21 |
14-3-3蛋白/14-3-3 α/β/γ/δ/ε亞型抗體 14-3-3 Alpha + Beta + Gamma + Delta + Epsilon |
肌管素相關(guān)蛋白2抗體 MTMR2 |
(TOLUIDINE BLUE)原位染色試劑盒 |
PE標(biāo)記人CD105單克隆抗體 human CD105/PE |
貓白介素2(IL-2)elisa檢測試劑盒 |
PE標(biāo)記小鼠Ly-6C單克隆抗體 mouse Ly-6C/PE |
Hanks'(1*HBSS)平衡鹽溶液,含酚紅500ml |
視桿細胞相關(guān)蛋白MREG抗體 DSU |
小鼠肌營養(yǎng)蛋白(DMD)elisa檢測試劑盒 |
絲氨酸蛋白酶45抗體 PRS45 |
人肺特異性X蛋白(LUNX)elisa分析檢測試劑盒 |
魚類甲狀腺素(T4)elisa分析檢測試劑盒 |
電擊法酵母細胞轉(zhuǎn)化試劑盒 |
LOVO+LUC人結(jié)直腸癌細胞熒光素酶標(biāo)記大鼠雙氫睪酮(DHT)elisa檢測試劑盒 |
大鼠穿孔素1(PRF1)elisa檢測試劑盒 |
人Rho GDP解離抑制因子1(ARHGDIA/GDIA1)elisa分析檢測試劑盒 |
小鼠生長停滯特異性蛋白6(GAS6)elisa檢測試劑盒 |
細胞EPHB4激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) |
實驗步驟:
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上,利用293T細胞進行慢病毒包裝,獲得含目的基因的慢病毒;
2 轉(zhuǎn)染前24 h進行細胞鋪板,轉(zhuǎn)染時細胞密度控制在80%左右;
3 天加入適量病毒懸液感染細胞,并置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育;
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基,并繼續(xù)培養(yǎng);
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng),直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%,獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系。