干冰運輸及復蘇好存活細胞

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

人胚胎眼鞏膜成纖維細胞系；HFSF (STR)

英文名稱	HFSF (STR)	產(chǎn)品形態(tài)	成纖維細胞樣 貼壁生長
貨號	P-X10513	產(chǎn)品分類	人細胞系
規(guī)格	1×106	包裝	株
來源	胚胎眼鞏膜	用途	僅供科研研究使用

細胞特性：

細胞別稱：HFSF-PI3；HFSF；人胚胎眼鞏膜成纖維細胞

種屬來源：人

年齡性別：胚胎

組織來源：胚胎眼鞏膜

生長特性：貼壁生長

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

背景簡介：HFSF細胞是由北京眼科研究所建系。

使用權限:A類

細胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測：無

基因表達情況：

保藏機構：中國醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所細胞資源中心

培養(yǎng)基：DMEM-H+10% FBS+1% PS

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

倍增時間：

STR鑒定位點Amelogenin：X，Y；CSF1PO：10，12；D13S317：10，11；D16S539：9，13；D18S51：17，18；D19S433：13，14；D21S11：31，32.2；D2S1338：18，19；D3S1358：15；D5S818：10，12；D7S820：11；D8S1179：10，16；FGA：18，22；TH01：7，10；TPOX：8；vWA：14；

細胞接收后的處理：
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。                      
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備MEM（推薦iCell-0012）培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二、細胞培養(yǎng)操作:

1) 復蘇細胞：將含有 1 mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 4 mL 培養(yǎng)基混 合均勻。在 1000 rpm 條件下離心 3 min，棄去上清液，加 1-2 mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有 細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜 (或將細胞懸液加入 6 cm 皿中，加入約 4 mL 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜) 。天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。 a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
b、加 1 mL 消化液 (0.25%Trypsin-0.53mM EDTA) 于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去 消化液，將培養(yǎng)瓶置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1 -3min (視細胞消化情況而定) ，然后在顯微鏡下 觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        。
c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細胞，裝入無菌離心管中，1000 rpm 條件下離心 4 min，棄去上清液， 用 PBS 清洗一遍，棄盡 PBS，進行細胞計數(shù)。
b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度 5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍 存管凍存 1mL 細胞懸液，注意凍存管做好標識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h 后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

公司正在出售的產(chǎn)品：

ATP結合蛋白家族4單克隆抗體 ABCB4	諾里病NDP蛋白/早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病蛋白抗體
Biotin標記人CD147單克隆抗體 human CD147/Biotin	酪蛋白硫酸轉移酶2抗體  Anti-TPST2
跨膜蛋白TMEM176B抗體 TMEM176B	GTF2H4
類固醇5α還原酶1抗體(5α-Reductase 1) SRD5A1	通用轉錄因子2H亞基4/TFIIH p52抗體
磷酸化磷酯酶Cβ3抗體  Anti-Phospho-PLC beta3 (Ser1105)	NORRIN
蛋白磷酸酶2C亞型α抗體  Anti-PP2CA/PPM1A	phospho-Ephrin B (Tyr329)
單鏈DNA結合蛋白相互作用蛋白1  Anti-SOSSC/C9orf80	嗅覺受體5AU17抗體
磷酸化Ephrin B抗體	OR5B17
大鼠β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)elisa分析檢測試劑盒	信號傳導抑制蛋白WD重復蛋白2抗體  Anti-WSB2/WD SOCS box protein 2
Aβ1-40 ELISA Kit	核孔蛋白NUP160抗體  Anti-NUP160
人核糖體合成蛋白NSA2源物(NSA2)elisa分析檢測試劑盒	腎素結合蛋白抗體  Anti-RENBP
HumanNSA2ELISAKit	磷酸鈉協(xié)轉運蛋白抗體  Anti-SLC34A2
豬αN乙酰葡糖胺糖苷酶(NAGLU)elisa分析檢測試劑盒	細胞RSK3激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
大鼠肌酸激酶工酶BB(CK-BB)elisa檢測試劑盒	人胚胎眼鞏膜成纖維細胞系；HFSF (STR)人基質金屬蛋白酶-3（MMP-3）elisa檢測試劑盒
整合素和生長因子樣蛋白1抗體	信號轉導蛋白9復合體7b抗體
LIMS1	CSN7b

三、培養(yǎng)注意事項:

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 
2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由 客戶自行承擔。 
3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。 
4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，，用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸 細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。 
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。 
6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。 
7. 該細胞僅供科研使用。 
8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議 1：2 傳代 。 
9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。