咨詢電話：18117197628
細胞接收后的處理：
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號
SK-MEL-28:SKMEL28
1×106
P-X957
產(chǎn)品詳情：
生長特性 貼壁細胞
細胞形態(tài) 多邊形
凍存條件
凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養(yǎng)方案A（默認）
生長培養(yǎng)基:MEM（ATCC改良）＋10% FBS＋1% P/S
培養(yǎng)條件:
氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃
推薦傳代比例 1:3-1:8
推薦換液頻率 2-3天/次
參考資料(來源文獻)
年齡（性別） 男性；51歲
組織來源 皮膚
細胞類型 腫瘤細胞
腫瘤類型 皮膚黑色素瘤
生物等級 BSL-1
倍增時間 27 hours (PubMed=7718330); 72 hours (PubMed=12479222); 26.9 hours (PubMed=20406486); 35.1 hours (NCI-DTP).
致瘤性 Yes; Yes, in nude mice; forms malignant melanoma (large round cell type)
保藏機構 AddexBio; C0020001/66 ATCC; HTB-72 BCRJ; 0289 CLS; 300337 ICLC; HTL99010 NCI-DTP; SK-MEL-28 RCB; RCB1930 - Discontinued TKG; TKG 0333
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
1）準備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細胞處理：
1）凍存細胞的復蘇：：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
|
魚白三烯B4(LTB4)elisa分析檢測試劑盒 |
鯊魚睪酮(T)elisa分析檢測試劑盒 |
|
LT-B4 ELISA Kit |
體外非細胞系統(tǒng)細胞色素P450亞酶CYP2D6（AMMC）活性 |
|
人丙二酸單酰輔酶A(malonyl CoA)elisa分析檢測試劑盒 |
IL-32ELISAKit |
|
HumanmalonylcoenzymeAELISAKit |
人白介素32(IL-32)elisa分析檢測試劑盒 |
|
小鼠1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)elisa檢測試劑盒 |
T ELISA Kit |
|
大鼠透明質酸酶1(HYAL1)elisa檢測試劑盒 |
NUP54 |
|
體液銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒 |
9號染色體開放閱讀框78抗體 |
|
NUP54抗體 |
C9orf78 |
|
APC標記的小鼠抗牛IgG H&L |
三葉肽因子2抗體 Anti-TFF2 |
|
Mouse Anti-Bovine IgG H&L / APC |
尿激酶型纖溶酶原激活因子抗體 Anti-PLAU/UPA/Urokinase |
|
溶質載體家族24成員4抗體 |
親環(huán)素相關蛋白1抗體 Anti-PPIL1 |
|
SLC24A4 |
DNA聚合酶δ相互作用蛋白3抗體 Anti-SKAR |
|
人CC趨化因子受體5(CCR5)elisa分析檢測試劑盒 |
小鼠球蛋白A(IgA)elisa分析檢測試劑盒 |
|
HumanCCR5ELISAKit |
SK-MEL-28人皮膚黑色素瘤細胞IgAELISAKit |
|
大鼠Smad7 elisa分析檢測試劑盒 |
人胱天蛋白酶-5(CASP5)elisa分析檢測試劑盒 |
|
Smad7 ELISA Kit |
HumanCASP5ELISAKit |
實驗步驟：
1 將目的基因構建到合適的慢病毒載體上，利用293T細胞進行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉染前24 h進行細胞鋪板，轉染時細胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉細胞系。