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英文名稱
TCCSUP:TCCSUP
產(chǎn)品形態(tài)
上皮細(xì)胞樣 貼壁細(xì)胞
貨號(hào)
P-X993
產(chǎn)品分類
人細(xì)胞系
規(guī)格
1×106
包裝
株
來源
膀胱
用途
僅供科研研究使用
產(chǎn)品詳情:
生長特性 貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
生長培養(yǎng)基 MEM(含NEAA)+10% FBS+1%P/S
凍存條件
凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養(yǎng)條件
氣相:空氣,95%;CO2,5%
溫度:37℃
推薦傳代比例 1:2-1:3
推薦換液頻率 2~3次/周
背景描述 The TCCSUP line was isolated in 1974 from an anaplastic transitional cell carcinoma (TCC) in the neck of the urinary bladder.
年齡(性別) 女;67歲
組織來源 膀胱
細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞
腫瘤類型 膀胱癌細(xì)胞
生物等級(jí) 1
倍增時(shí)間 28 hours (PubMed=3708594); 46 hours (PubMed=25984343); 49.2 hours (PubMed=26055179); ~30-40 hours (DSMZ).Microsatellite instability: Stable (MSS) (Sanger)
抗原表達(dá)情況 HLA 2, 3, 7, 12
保藏機(jī)構(gòu) ATCC; HTB-5 DSMZ; ACC-377
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理:
1)收到細(xì)胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細(xì)胞處理:
1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇::將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:1、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例:
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理:
實(shí)驗(yàn)步驟:
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上,利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝,獲得含目的基因的慢病毒;
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板,轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右;
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞,并置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育;
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基,并繼續(xù)培養(yǎng);
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng),直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%,獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。
公司正在出售的產(chǎn)品:
LYPD1蛋白抗體 |
原鈣粘蛋白15抗體 |
LYPD1 |
磷酸化鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體 Anti-Phospho-Troponin I(Ser23/24) |
細(xì)胞色素P450 2D10抗體 |
Histone H2B (mono methyl K5) |
Cytochrome P450 2D10 |
單甲基組蛋白H2B K5抗體 |
血小板活化因子抗體 Anti-PAF |
PCDHB15 |
蛋白激酶Aγ抗體 Anti-PKA gamma |
Rabbit Anti-Guinea Pig IgM / FITC |
神經(jīng)突觸素3抗體 Anti-Synapsin III |
磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白16抗體 |
FITC標(biāo)記的兔抗豚鼠IgM |
phospho-APC6 (Thr560) |
大鼠C-C趨化因子6(CCL6)elisa分析檢測試劑盒 |
鋅指蛋白ZBTB38抗體 Anti-ZBTB38 |
CCL6 ELISA kit |
肉豆蔻?;D(zhuǎn)移酶2-N端肽抗體 Anti-NMT2 |
人肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(L-FABP)elisa分析檢測試劑盒 |
Rho相關(guān)蛋白激酶2抗體 Anti-ROCK2 |
HumanL-FABPELISAKit |
Saitohin蛋白抗體 Anti-STH/Saitohin |
大鼠鈣網(wǎng)蛋白(CRT)elisa檢測試劑盒 |
人β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)elisa檢測試劑盒 |
小鼠微管蛋白β3(TUBB3)elisa分析檢測試劑盒 |
TCCSUP人膀胱癌細(xì)胞酵母F型ATP酶(F type ATPase)活性比色法定量檢測試劑盒 |
甘露聚糖結(jié)合凝集素抗體 |
DENND2A蛋白抗體 |
Mannan Binding Lectin |
DENND2A |