咨詢電話：18117197628
細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號
LNCaP clone FGC:LNCaP clone FGC
1×106
P-X822
產(chǎn)品詳情：
生長特性 貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
生長培養(yǎng)基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S
凍存條件
凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
推薦傳代比例 1:3-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
注意事項 1）該細(xì)胞并不形成一致的單層，而是形成集落。（2）該細(xì)胞會使培養(yǎng)基快速變酸，且生長緩慢，故傳代后 48 小時內(nèi)不應(yīng)擾動；（3）普通TC處理的培養(yǎng)瓶或皿不能使細(xì)胞很好的貼壁，培養(yǎng)難度較高，需使用 Corning 的 cellbind 細(xì)胞培養(yǎng)瓶，或者使用多聚-L-賴氨酸溶液包被過的培養(yǎng)皿； （4）在細(xì)胞運輸途中，多數(shù)細(xì)胞會從培養(yǎng)瓶底分離，大片懸浮在培養(yǎng)基中，按照收貨注意事項處理即可恢復(fù)正常。
背景描述 人前列腺癌細(xì)胞LNCaP clone FGC是從一位50歲白人男性(血型B+)的左鎖骨結(jié)針刺活檢中分離，該患者經(jīng)確診為前列腺癌轉(zhuǎn)移。LNCaP clone FGC細(xì)胞對5-α-二氫睪酮(生長調(diào)節(jié)子和酸性磷酸脂酶產(chǎn)物)有響應(yīng)。LNCaP clone FGC細(xì)胞并不形成一致的單層，而是形成集落，在傳代時可以用滴管反復(fù)吹吸打碎。LNCaP clone FGC細(xì)胞僅僅輕輕地吸附在基底上，不形成匯合，很快使培養(yǎng)基變酸。LNCaP clone FGC細(xì)胞生長極其緩慢，傳代后48小時內(nèi)不應(yīng)擾動。當(dāng)培養(yǎng)瓶封包后，多數(shù)LNCaP clone FGC細(xì)胞從培養(yǎng)瓶底分離，懸浮在培養(yǎng)基中。收到后，在通常培養(yǎng)單層細(xì)胞的條件下培養(yǎng)24-48小時，以使細(xì)胞再貼壁。此后，可以換上新鮮培養(yǎng)液。如果需要，培養(yǎng)瓶內(nèi)容物可以收集，300g離心15分鐘，以10毫升培養(yǎng)液重懸并培養(yǎng)到一個單獨的培養(yǎng)瓶中。
年齡（性別） 男；50歲
組織來源 前列腺；左鎖骨結(jié)癌轉(zhuǎn)移灶
細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞
腫瘤類型 前列腺癌細(xì)胞
生物等級 1
倍增時間 ~32-36 hours
致瘤性 Yes, in soft agar.Yes, the cells are tumorigenic in nude mice.
受體表達(dá)情況 androgen receptor, positive;estrogen receptor, positive
基因表達(dá)情況 human prostatic acid phosphatase; prostate specific antigen
保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CRL-1740 BCRC; 60088 BCRJ; 0149 ECACC; 89110211
干冰運輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
|
角蛋白相關(guān)蛋白KAP22.1抗體 |
角蛋白相關(guān)蛋白KAP8.1抗體 |
|
KAP22.1 |
大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)elisa分析檢測試劑盒 |
|
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白129抗體 |
CCDC153 |
|
CCDC129 |
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白153抗體 |
|
細(xì)胞培養(yǎng)污染性支原體A.laidlawii鑒定16S rDNA |
KAP8.1 |
|
氨基環(huán)丙烷羧酸含量測試盒 |
RHOBTB1 |
|
碘成分比色法定量檢測試劑盒 |
KIAA1644蛋白抗體 |
|
Rho相關(guān)結(jié)構(gòu)域BTB蛋白質(zhì)1抗體 |
KIAA1644 |
|
Cy5標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG H&L |
氏菌鞭毛抗原H抗體 Anti-Salmonella enteritidis H |
|
Goat Anti-Guinea Pig IgG H&L / Cy5 |
原鈣粘附蛋白18抗體 Anti-PCDH18 |
|
G氨基丁酸A型受體rho3 /GABAA Rρ2/GABAc Rρ3抗體 |
蛋白質(zhì)磷酸酶1B抗體（PP2Cβ） Anti-PPM1B |
|
GABRR3 |
尿酸鹽重吸收轉(zhuǎn)運子1抗體 Anti-URAT1/SLC22A11 |
|
綿羊基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP1)elisa分析檢測試劑盒 |
小鼠多巴胺D1受體(D1R)elisa分析檢測試劑盒 |
|
Sheep matrix metallopeptidase 1(interstitial collagenase)(MMP1)ELISA kit |
LNCaP clone FGC人前列腺癌細(xì)胞D1RELISAKit |
|
類人猿降鈣素(CT)elisa分析檢測試劑盒 |
人蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶1(PRMT1)elisa分析檢測試劑盒 |
|
CT ELISA Kit |
HumanPRMT1ELISAKit |
實驗步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。