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細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號(hào)
K562:K562
1×106
P-X803
產(chǎn)品詳情：
細(xì)胞別稱：K562; K 562; GM05372
種屬來源：人
年齡性別：女；53歲
組織來源：骨髓；慢性骨髓性白血病(CML)
生長特性：懸浮生長
細(xì)胞形態(tài)：母細(xì)胞樣
背景簡介：k562細(xì)胞是由Lozzio從一名53歲的慢性髓細(xì)胞性白血病急變期的女性患者的胸水中分離建立的。該細(xì)胞曾被認(rèn)為來源于粒系，處于高度未分化階段；Anderson等人作了細(xì)胞膜特性的研究后，認(rèn)為該細(xì)胞是紅白血病細(xì)胞系。該細(xì)胞是對(duì)自然殺傷細(xì)胞高度敏感的體外靶標(biāo)，故而被廣泛應(yīng)用于這方面的研究。K562的原始細(xì)胞是一種具有多向分化潛能的造血系統(tǒng)的惡性腫瘤細(xì)胞，能自發(fā)分化為紅系、粒系和單核系的可辨識(shí)的祖細(xì)胞，該細(xì)胞表達(dá)CD7（25％）
生物等級(jí)：1
細(xì)胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測(cè)：無
基因表達(dá)情況：
保藏機(jī)構(gòu)：ATCC; CCL-243 BCRC; 60007 BCRJ; 0126 CCLV; CCLV-RIE 0439 DSMZ; ACC-10 ECACC; 89121407
培養(yǎng)基：RPMI-1640+10% FBS+PS
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件：無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
倍增時(shí)間：~30-48 hours
STR鑒定位點(diǎn)Amelogenin：X；CSF1PO：9，10；D13S317：8；D16S539：11，12；D18S51：15，16；D19S433：14，14.2；D21S11：29，30，31；D2S1338：17；D3S1358：16；D5S818：11，12；D7S820：9，11；D8S1179：12；FGA：21，24；TH01：9.3；TPOX：8，9；vWA：16；
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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卡爾曼綜合癥基因1抗體 |
魚補(bǔ)體蛋白4(C4)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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KAL1 |
小鼠音猬因子N端(Shh-N)elisa檢測(cè)試劑盒 |
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心動(dòng)加速蛋白多肽抗體 |
HumanR-PKELISAKit |
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CCAP |
人丙酮酸激酶R型工酶(R-PK)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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大鼠苗條素受體(LR/Ob-R)elisa檢測(cè)試劑盒 |
C4 ELISA Kit |
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TRP高效液相色譜電化學(xué)定量檢測(cè)試劑盒 |
NIRF |
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水土中總磷酸鹽測(cè)試盒 |
線粒體甘油3磷酸?；D(zhuǎn)移酶抗體 |
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環(huán)指蛋白107抗體 |
GPAM |
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PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗小鼠IgG H&L |
TTC33蛋白抗體 Anti-TTC33 |
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Rabbit Anti-Mouse IgG H&L / PE-Cy5.5 |
磷酸化肽基脯氨酞順反異構(gòu)酶Pinl抗體 Anti-Phospho-Pin1 (Ser16) |
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FAM55D蛋白抗體 |
嗜酸性粒細(xì)胞顆粒關(guān)鍵堿性蛋白抗體 Anti-PRG2 |
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FAM55D |
應(yīng)激誘導(dǎo)分泌蛋白1抗體 Anti-SISP1/GI24 |
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人EB病毒核抗原3A抗體(IgM)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
小鼠前列腺素E2(PGE2)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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HumanEpsteinBarrnuclearantigens3IgMantibodyELISAKit |
K562人慢性骨髓性白血病細(xì)胞系PGE2ELISAKit |
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大鼠白介素13(IL-13)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
人混合細(xì)胞反應(yīng)封閉因子(MLR-Bf)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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IL-13 ELISA KIT |
HumanMLR-BfELISAKit |
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。