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細胞接收后的處理：
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號
COLO205:COLO205
1×106
P-X690
產品詳情：
細胞別稱：Colo 205; CoLo 205; COLO-205; Colo-205; COLO.205; Colo205; COLO205; Co 205；人結腸癌細胞
種屬來源：人
年齡性別：男；70歲
組織來源：結直腸腺癌，腹水轉移
生長特性：半貼半懸生長
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
背景簡介：COLO 205細胞細胞系1957年由T.U.Sample等從患有結腸癌的70歲男性白人的腹水分離。 該病人在取腹水樣品前已用5-氟尿嘧啶4-6周。角蛋白過氧化物酶染色陽性。
生物等級：1
細胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測：無
基因表達情況：carcinoembryonic antigen (CEA) 1.5 to 4.1 ng/10^6 cells cells/10 days; keratin; interleukin 10 (IL-10, interleukin-10), The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining.
保藏機構：ATCC; CCL-222 BCRC; 60054 ECACC; 87061208
培養(yǎng)基：80% RPMI-1640+20% FBS
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存
倍增時間：~25-30 hours
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
1）準備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
二．細胞處理：
1）凍存細胞的復蘇：：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理：
公司正在出售的產品：
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Nogo-66(1-40)抗體 |
補體C3b-α鏈抗體 Complement C3b alpha' chain |
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NEP1-40 |
磷酸化肌球蛋白輕鏈6抗體 phospho-MYL6 (Tyr29+Ser30) |
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6號染色體開放閱讀框81抗體 |
鋅指蛋白256抗體 ZNF256 |
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C6orf81 |
小鼠抗人CD22單克隆抗體 human CD22 |
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磷酸化腎上腺素能受體β2/β2-AR抗體 phospho-ADRB2 (Ser355 + Ser356) |
成纖維細胞生長因子受體2抗體 FGFR2 |
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CREB轉錄共激活因子TORC2抗體 TORC2 |
環(huán)化酶相關蛋白CAP-2抗體 CAP2 |
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DNAJC17蛋白抗體 DNAJC17 |
轉錄因子7樣蛋白1抗體 TCF7L1 |
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核因子1A抗體 NFIA |
轉運蛋白SEC61β亞基抗體 SEC61 beta |
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PROPIDIUM IODIDE細胞核形態(tài)染色試劑盒 |
神經突觸相關蛋白SLITRK3抗體 SLITRK3 |
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大鼠絲裂原激活蛋白激酶激酶激酶6(MAP3K6)elisa檢測試劑盒 |
生物素標記的癌胚抗原相關細胞粘附分子8抗體 CEAcam8, Biotin conjugated |
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酵母菌CSM-△LEU/△TRP培養(yǎng)基 |
NF-kappa-B抑制子epsilon抗體 phospho-IKB epsilon (Ser22) |
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膜蛋白、核蛋白和胞質蛋白抽提試劑盒 50T |
PE-Cy7標記人CD105單克隆抗體 human CD105/PE-Cy7 |
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低密度脂蛋白膽固醇LDL-C測定試劑盒 100管/96樣 比色法 |
小鼠基質金屬蛋白酶7(MMP-7)elisa檢測試劑盒 |
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核固著液（ZENKER） |
COLO205人結腸癌細胞大鼠層粘連蛋白α1(LAMα1)elisa檢測試劑盒 |
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鳥苷酸酶總活性比色法定量檢測試劑盒 |
NAD激酶（NADK）測試盒 |
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小鼠白介素-5(IL-5)elisa分析檢測試劑盒 |
細胞CYP2B1蛋白表達比色法定量檢測試劑盒 |
實驗步驟：
1 將目的基因構建到合適的慢病毒載體上，利用293T細胞進行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉染前24 h進行細胞鋪板，轉染時細胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉細胞系。