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操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
特點(diǎn):
1、優(yōu)化設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)方案,1小時(shí)即可完成
2、靈敏度高,操作便捷
3、試劑盒提供檢測果糖所需的全套試劑
產(chǎn)品名稱 |
NFκB-p65 Ab-529 Antibody |
規(guī)格 |
詳見說明 |
貨號 |
BH-01S4393 |
常見樣本處理方法:
1、血清(漿)樣品:直接檢測。
2、細(xì)胞或組織樣品的制備:培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)胞數(shù)量
(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1 的比例(建議 500萬細(xì)胞加入 1mL提取液) ,超聲波破碎細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲 3s,間隔10s,重復(fù)30 次)8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g) :提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g組織,
加入 1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則:
1、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí),避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會自然流下去。
2、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快,以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。
3、溫浴時(shí),要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,防止水分的蒸發(fā)。
4、洗液不夠時(shí),可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
5、實(shí)驗(yàn)時(shí),要使底物避光保存。
6、洗板時(shí),每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,使清洗更加徹底。沒有洗板機(jī)時(shí),倒去液體后,要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。
7、要在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復(fù)到室溫,以使結(jié)果更穩(wěn)定。
8、吸取液體時(shí),要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
9、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后,要更換槍頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)。
10、液體全部加完后,可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動功能。
試劑使用須知:
(1)請參照相關(guān)法規(guī)、文獻(xiàn)、MSDS等信息,理解并掌握好試劑的特性,再進(jìn)行**操作。
(2)通常購買試劑時(shí)一定要想到一次性用完。若估算不足有剩余的話,更加注意其他保管和管理。
(3)萬一試劑操作者并非專業(yè)技術(shù)人員。必須在專業(yè)人士的指導(dǎo)監(jiān)督下進(jìn)行操作。對于使用后的廢棄物,不要或者舊的試劑,應(yīng)按照相關(guān)法律法規(guī)正當(dāng)處理。
(4)購買后,請務(wù)必確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項(xiàng);做好預(yù)防顛倒,摔壞的措施和管理體制;在使用前再次確認(rèn)標(biāo)簽上的注意事項(xiàng),做好必要的**對策;對沒有標(biāo)明其危害特性、有害特性的,也要慎重地進(jìn)行操作;必須帶好防護(hù)用具,小心翼翼進(jìn)行操作。
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