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抗體的種類:
抗體是在抗原刺激下產(chǎn)生的,體液性抗體由B淋細(xì)胞系產(chǎn)生。根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)和抗原的不同可分為IgG、IgM、IgA、 IgE和IgD5種類型.目前對疫球蛋白G、A、M、E了解較多,對D的功能了解較少。
(1) IgG:是血清中濃度大的一類球蛋白,約占疫球蛋白含量的70~80%,50%分布于血漿。機體受到抗原初次刺激后,其產(chǎn)生時間僅次于IgM。在抗體介導(dǎo)的抗感染免中起主要作用。IgG是球蛋白單體,分子量16萬~18萬,可以通過兔的胎盤,但不能通過豬和牛的胎盤。在體內(nèi)可以有效地抵抗**、病毒等微生物侵襲。在體外的血清學(xué)反應(yīng)中,參與沉淀反應(yīng)、凝集反應(yīng)、補體結(jié)合反應(yīng)和中和反應(yīng)。
(2) IgM:由5個球蛋白單位組成的五聚體,在血清中的含量僅次于IgG,分子量90萬,是體內(nèi)大的球蛋白??乖醮未碳C體后,IgM出現(xiàn)早,在血清中的含量僅次于IgG,主要分布在血管內(nèi),可以通過激活補體發(fā)揮溶菌、溶細(xì)胞及中和病毒的作用。因其是五聚體,免作用很強,是IgG的100倍,但由于含量僅為IgG的1/10,且持續(xù)時間短,所以在抗感染疫中不能起主要作用。在體外的血清學(xué)反應(yīng)中,參與凝集反應(yīng)和補體結(jié)合反應(yīng)。
(3) IgA:有單體和雙體兩種形式。單體存在于血清中,分子量約為17萬,亦稱為血清型IgA,有**和抗病毒作用。雙體主要存在于外分泌液中,如唾液、淚液、初乳、氣管分泌液,以初乳中的含量高。雙體IgA亦稱為分泌型IgA,由存在于粘膜和組織上的漿細(xì)胞產(chǎn)生,分子量40萬,含量較單體高6~8倍,是粘膜的重要防御因素,可以阻止**或病毒吸附于粘膜表面。
(4) IgE:是一種特殊的糖蛋白,為單位體結(jié)構(gòu),分子量19萬,由消化道、呼吸道粘膜固有層及局部結(jié)中的漿細(xì)胞所形成,在血清中含量甚微,是一種致敏抗體,容易吸附在**表面,當(dāng)與相應(yīng)抗原結(jié)合所引起過敏反應(yīng)。在機體抵抗**和病毒的感染中幾乎無作用。
別 名 Myelin associated glycoprotein; L-MAG; brain-specific neuronal polypeptide 1B236; Myelin-associated glycoprotein; Sialic acid-binding Ig-like lectin 4a; Siglec-4a; Brain neuron cytoplasmic protein 3; MAG_HUMAN.
英文名稱 Anti-MAG-a/L-MAG
中文名稱 髓鞘相關(guān)糖蛋白-a抗體
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.1ml/100μg 0.2ml/200μg
抗體來源 Rabbit
克隆類型 polyclonal
交叉反應(yīng) Human, Mouse, Rat, Dog, Cow, Horse
產(chǎn)品類型 一抗
研究領(lǐng)域 細(xì)胞生物 神經(jīng)生物學(xué)
蛋白分子量 predicted molecular weight: 67kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human MAG-a C-terminus
亞 型 IgG
本公司產(chǎn)品僅用于科研實驗。
抗體的熒光標(biāo)記法:
(一)基本原理
賴氨酸殘基的游離e-氨基可與FITC(其激發(fā)波長為492nm,發(fā)射光波長為525nm)共價結(jié)合。與FITC結(jié)合的抗體可用為特異性的探針,以測定細(xì)胞相應(yīng)抗原的存在。FITC具有很高的量子產(chǎn)量(發(fā)射光與吸收光的比值,0.85)形成的偶聯(lián)物的穩(wěn)定性很好。
(二)儀器和試劑
1.待偶聯(lián)抗體;
2.碳酸氫鈉緩沖液;
3.疊氮鈉;
4.庵氰酸熒光素;
5.電磁攪拌器。
抗體反應(yīng)特點:
1.高度特異性,特異性是抗原抗體反應(yīng)的主要特征,特定抗原決定簇只與特定抗體結(jié)合;
2.可逆性:抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過程是一種動態(tài)平衡, 其反應(yīng)式為:Ag+AbAg·Ab;
3.適當(dāng)濃度和比例;
4.敏感性:在測定血清中某一物質(zhì)的含量時,化學(xué)比色法的敏感度為mg/ml水平,酶反應(yīng)測定法的敏感度約為5~10μg/ml,定中凝膠擴散法的敏感度與酶反應(yīng)法相仿。
抗體反應(yīng)的因素:
1.電解質(zhì) :抗原抗體特異結(jié)合后,膠體粒便可發(fā)生脫水作用,此時易受電解質(zhì)影響,如有適當(dāng)濃度的電解質(zhì)存在就會使它們失去部分負(fù)電荷而相互凝聚,于是出現(xiàn)明顯的凝集或沉淀現(xiàn)象。
2.酸堿度:合適的pH為6-8。
3.溫度:37℃通常是抗原體反應(yīng)溫度。
實驗步驟:
1、石蠟切片,常規(guī)脫蠟至水
2、蒸餾水沖洗,pbs 浸泡5 分鐘(如需采用抗原修復(fù),在此步驟后進行)。
3、3%雙氧水去離子水(無色液體)孵育15-20 分鐘,以消除內(nèi)源性過氧物酶活性。
4、滴加試劑A(藍色液體)室溫孵育15-20 分鐘,傾去,勿洗。
5、滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗,37℃孵育2-3 小時或4℃過夜。
6、PBS 沖洗,3 分鐘3 次。
7、滴加試劑B(黃色液體),室溫或37℃孵育15-20 分鐘。
8、PBS 沖洗,3 分鐘3 次。
9、滴加試劑C(橙色液體),室溫或37℃孵育15-20 分鐘。
10、PBS 沖洗,3 分鐘3 次。
11、顯色劑顯色(DAB 或AEC)
12、自來水充分沖洗。
13、如果需要,可進行復(fù)染,脫水,透明。
14、選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?/span>
抗體分子標(biāo)記技術(shù):
(一)原理
當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所**的自由分子可與某些基團進行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應(yīng)的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準(zhǔn)備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
Fidgetin蛋白(FIGN)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforFidgetin(FIGN) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
214kDa核孔蛋白(NUP214)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforNucleoporin214kDa(NUP214) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2(IGFBP2)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforInsulinLikeGrowthFactorBindingProtein2(IGFBP2) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
封閉蛋白4(CLDN4)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforClaudin4(CLDN4) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
耐扭蛋白1B(TOR1B)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforTorsin1B(TOR1B) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
半胱氨酸豐富分泌蛋白3(CRISP3)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforCysteineRichSecretoryProtein3(CRISP3) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
腎素(REN)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforRenin(REN) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
黃體(LH)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforLuteinizingHormone(LH) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
成纖維生長因子3(FGF3)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforFibroblastGrowthFactor3(FGF3) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
電碳酸氫鈉協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白4(NBC4)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISAKitforElectrogenicSodiumBicarbonateCotransporter4(NBC4) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
BactoTM Agar
RPMI 1640,干粉
(IVD) 含L-谷氨酰胺,不含碳酸氫鈉31800-022
Peptone Bacteriological Neutralised 中性細(xì)學(xué)蛋白胨 Oxoid500g
鹽肉肉湯 (CM0094) Oxoid
MRS 瓊脂 (CM0361) Oxoid
耶爾森選擇瓊脂基礎(chǔ)(CIN 瓊脂基礎(chǔ)/Schiemann 培養(yǎng)基基礎(chǔ)) (CM0653) Oxoid
西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂 250(g)
髓鞘相關(guān)糖蛋白-a抗體N-乙-N-(3-磺丙)-3-甲胺鈉鹽(TOPS)英文名稱:N- ethyl -3- (3-) -N- (TOPS)分子量: C12H18NNaO3SCAS號:40567-80-4
秦皮苷英文名稱:Fraxin分子量:C16H18O10CAS號:524-30-1
1,2-Bis[Bis[3,5-Bis(Trimethylsilyl)Phenyl]Phosphino]Benzene英文名稱:1,2-Bis[Bis[3,5-Bis (Trimethylsilyl) Phenyl]Phosphino]Benzene分子量:CAS號:1203710-21-7
溴甲酚紫英文名稱:Bromocresol purple分子量: C21H16Br2O5SCAS號:115-40-2
2-(4-溴)吡分子式:CAS號:分子量:
2-溴甲四氫呋喃分子式:165.03CAS號:1192-30-9分子量: C5H9BrO
順-2,3-聯(lián)-1-丙氮丙分子式:237.34CAS號:314062-46-9分子量: C17H19N
5,8-二溴-2,3-雙(4-甲氧)喹喔啉分子式:500.19CAS號:162967-90-0分子量: C22H16Br2N2O2
2,3-二氫并呋喃分子式:120.15CAS號:496-16-2分子量: C8H8O
2-氟-3-硝吡分子式:142.09CAS號:1480-87-1分子量: C5H3FN2O2