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使用方法:
1.旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。
2.蛋白酶抑制劑在 2-8℃時(shí)是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或 37℃短時(shí)間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。
3.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷;所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。
4.蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀,不影響使用,溶解后正常使用。
5.如果試劑盒不能短時(shí)間內(nèi)用完,蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
6.可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
1. 提取液準(zhǔn)備: 每 500ul 冷的蛋白提取液中加入 2ul 蛋白酶抑制劑混合物 B 和 2ul 蛋白酶抑制劑混合物 C,混勻后置冰上備用。
2. 取 100-200mg 皮膚組織樣本,用 PBS 洗干凈,然后用手術(shù)剪刀盡可能剪碎,加入 500ul 蛋白提取
液,用組織勻漿器/勻漿機(jī)勻漿至無(wú)明顯肉眼可見(jiàn)固體。
3. 將組織勻漿吸入一預(yù)冷的干凈離心管中,在 4℃條件下振蕩 30-40 分鐘。
4. 在 4℃,10000-14000×g 條件下離心 15 分鐘。
5. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管,即得到皮膚組織蛋白。
6. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。