自備儀器和試劑耗材：

儀器準備：

1.離心機

2.振蕩器
3.勻漿機/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
試劑準備： 

1.PBS 緩沖液 

2.蛋白定量試劑盒
耗材準備： 

1.離心管

2.吸頭
3.一次性手套

產品簡介：

使用方法：
旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
蛋白酶抑制劑在 2-8℃時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或 37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。本公司產品僅用于科研實驗。
注意事項：
1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得佳實驗效果。
2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。
3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。
4. 樣品或試劑被污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。
5. 好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹底殘留清潔劑。
6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規(guī)定程序處理。

操作步驟：

A：組織中提取

1.收集 0.1g 組織，加入 1.0ml Lysis Buffer 1 及適量蛋白酶抑制劑（依據實驗選擇），冰上用組織研磨器或勻 漿管研磨。

2.將勻漿后樣品轉移至 1.5ml 離心管中，11000rpm 5min，吸棄上清保留沉淀。

3.至步驟 2。

B：細胞中提取

1.收集約 10 8個細胞，3000rpm 5min（懸浮細胞直接離心，貼壁細胞使用細胞刮刀或胰蛋白酶消化離心收集 均可。注意用預冷 PBS 清洗殘留培養(yǎng)基和胰蛋白酶等），吸棄上清。

2.至步驟 1。

步驟 1：加 1.0ml Lysis Buffer 1 及適量蛋白酶抑制劑（依據實驗選擇），冰上孵育 30min（每 10min 用移液槍 吹打一次），4°C 11000rpm 離心 5min，棄上清。

步驟 2：于上述步驟離心管中加入 200μl Lysis Buffer 2，置于冰上 30min（每 10min 渦旋一次），4°C 11000rpm 離心 5min，吸取上清于一新離心管中。

步驟 3：加入 40μl Balance Buffer 于上述步驟離心管中，用移液槍輕輕吹勻。

步驟 4：使用 BCA 定量試劑盒定量。

步驟 5：于步驟 3 離心管中加入 2.4μl Adjust Buffer，輕輕吹勻，并應用于下游研究。

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胰蛋白胨T（Tryptone T）    Oxoid500g

高純度瓊脂(Purified Agar)    Oxoid500g

中性大豆蛋白胨（Soya Peptone Neutralised）    Oxoid400g

Peptone MycologicaL 真蛋白胨    Oxoid500g

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胰蛋白示（Trytose）    Oxoid500g