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qPCR 實驗Ct 值偏大或普通 PCR 產量低分析
日期：2024-11-21 17:42
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摘要：
逆轉錄后的 qPCR 實驗 Ct 值偏大或者普通 PCR 產量低。
1、 RNA 模板質量差，需要重新制備 RNA 模板，可通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質量。
2、 逆轉錄后的 cDNA 中含有高濃度的模板 RNA 和逆轉錄試劑成分，可能會對后續(xù)的PCR 產生抑制作用，所以可以適當梯度提高 cDNA 稀釋比例（通常來說可將 cDNA 原液稀釋5-10倍，其zui 佳模板加入量以擴增得到的 Ct 值在20-30個循環(huán)為好）。
3、 起始的 RNA 模板量低，需要減少稀釋倍數或增加 RNA 模板量。
4、 基因本身原因（復雜和長度），可以重新設計復雜基因...
逆轉錄后的 qPCR 實驗 Ct 值偏大或者普通 PCR 產量低。
1、 RNA 模板質量差，需要重新制備 RNA 模板，可通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質量。
2、 逆轉錄后的 cDNA 中含有高濃度的模板 RNA 和逆轉錄試劑成分，可能會對后續(xù)的PCR 產生抑制作用，所以可以適當梯度提高 cDNA 稀釋比例（通常來說可將 cDNA 原液稀釋5-10倍，其zui 佳模板加入量以擴增得到的 Ct 值在20-30個循環(huán)為好）。
3、 起始的 RNA 模板量低，需要減少稀釋倍數或增加 RNA 模板量。
4、 基因本身原因（復雜和長度），可以重新設計復雜基因的引物，避免復雜結構?；蛘哂萌椒ǔ绦蚧蜓娱L兩步法程序的延伸時間。
5、 逆轉錄或者定量產品性能差，可以通過做平行不用品牌產品對比實驗，對比逆轉錄產品性能。