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細胞凍存原理
日期：2024-11-22 13:25
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摘要：
當細胞所處溫度低于0°C時，細胞脫水，細胞中可溶性物質濃度升高，并在細胞內形成冰晶，冰晶的大小對細胞的影響是不同的，大冰晶容易造成細胞膜、細胞器的損傷和破裂，故造成復蘇出來的細胞存活率、狀態(tài)等與凍存前的狀態(tài)相差甚遠。因此，我們在凍存細胞的時候會采取兩個措施，一加入低溫保護劑，二慢凍細胞。
凍存時機：細胞應在生長良好、密度約為 80-90％、數(shù)目一般為 10 6 -10 7 /ml，活力差的細胞在凍存后的成活率很小。
低溫保護劑：常用的低溫保護劑是二甲基亞砜DMSO，它是一種...
當細胞所處溫度低于0°C時，細胞脫水，細胞中可溶性物質濃度升高，并在細胞內形成冰晶，冰晶的大小對細胞的影響是不同的，大冰晶容易造成細胞膜、細胞器的損傷和破裂，故造成復蘇出來的細胞存活率、狀態(tài)等與凍存前的狀態(tài)相差甚遠。因此，我們在凍存細胞的時候會采取兩個措施，一加入低溫保護劑，二慢凍細胞。
凍存時機：細胞應在生長良好、密度約為 80-90％、數(shù)目一般為 10 6 -10 7 /ml，活力差的細胞在凍存后的成活率很小。
低溫保護劑：常用的低溫保護劑是二甲基亞砜DMSO，它是一種滲透保護劑，可迅速透入細胞，提高細胞膜對水的通透性，降低冰點，延緩凍結過程，能使細胞內水分在凍結前透出細胞外，在胞外形成冰晶，減少胞內冰晶，從而減少冰晶對細胞的損傷。
慢凍細胞：可以使用程序性降溫盒，緩慢凍存細胞，可使細胞內避免產生大的冰晶。如果沒有程序降溫盒，可以將凍存細胞依次放于4度1h，-20度2h，-80過夜，大部分細胞也可以適應。
凍存液配置：凍存液應該提前配制，置于室溫備用，防止臨時配制產生的熱量損傷細胞（DMSO加入到培養(yǎng)基中會放熱），凍存液常規(guī)配比為培養(yǎng)基：血清：DMSO=7:2:1，如果細胞比較珍貴，可以調整為血清：DMSO=9:1。