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PCR反應(yīng)擴增產(chǎn)物出現(xiàn)多條帶分析
日期:2024-11-21 20:26
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摘要:
擴增產(chǎn)物出現(xiàn)多條帶
(1)引物用量偏大,引物的特異性不高。應(yīng)調(diào)換引物或降低引物的使用量。
(2)循環(huán)的次數(shù)過多。適當(dāng)增加模板的量,減少循環(huán)次數(shù)。
(3)酶的用量偏高或酶的質(zhì)量不好,應(yīng)降低酶量或調(diào)換另一來源的酶。
(4)退火溫度偏低,退火及延伸時間偏長。應(yīng)提高退火溫度,減少變性與延伸時間,也可采用二種溫度的PCR擴增。
(5)樣品處理不當(dāng)。
(6)Mg2+濃度偏高,因適當(dāng)調(diào)整Mg2+使用濃度。
(7)若為PCR試劑盒,也可能時試劑盒本身質(zhì)量有問題。
擴增產(chǎn)物出現(xiàn)多條帶
(1)引物用量偏大,引物的特異性不高。應(yīng)調(diào)換引物或降低引物的使用量。
(2)循環(huán)的次數(shù)過多。適當(dāng)增加模板的量,減少循環(huán)次數(shù)。
(3)酶的用量偏高或酶的質(zhì)量不好,應(yīng)降低酶量或調(diào)換另一來源的酶。
(4)退火溫度偏低,退火及延伸時間偏長。應(yīng)提高退火溫度,減少變性與延伸時間,也可采用二種溫度的PCR擴增。
(5)樣品處理不當(dāng)。
(6)Mg2+濃度偏高,因適當(dāng)調(diào)整Mg2+使用濃度。
(7)若為PCR試劑盒,也可能時試劑盒本身質(zhì)量有問題。