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PCR定量試劑盒的注意事項介紹
日期:2024-11-22 19:26
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摘要:
PCR定量試劑盒的注意事項
由于本品檢測靈敏度極高,即使空氣中微量的DNA氣溶膠都可以引起污染,進而導致實驗失敗。因此反應體系配制時請于超凈工作臺內(nèi)進行,配制過程中請使用干凈**槍頭、反應管,條件容許的實驗室推薦使用專用的移液槍,避免交叉污染;
由于本品中含有熒光染料SYBRGreen I,因此無論保存還是配置反應體系時都應該盡量避免強光照射;
本產(chǎn)品中不含用以校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號誤差的Rox ReferenceDye,客戶可根據(jù)qPCR儀器技術(shù)指導決定是否需要加ROX內(nèi)參染料,用于消除信號本底以及校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號誤差;
建議在冰上配制PCR反應液,再放入PCR儀器中擴增??梢蕴岣邤U增特異性,減少背景;
模板DNA:用本產(chǎn)品,cDNA、基因組DNA、質(zhì)粒DNA、病毒DNA等都可作為模板。在添加DNA模板時請注意模板量對PCR擴增的影響。本產(chǎn)品建議添加量為:
cDNA添加量不應超過總反應體系的10%;基因組DNA為模板時,為避免在高濃度區(qū)域出現(xiàn)線性差的情況,請注意添加量小于500ng;病毒DNA也可作為PCR模板,添加時請以300ng為上限;由于質(zhì)粒DNA濃度和拷貝數(shù)很高,在添加PCR模板之前*好進行稀釋梯度試驗,以便確定合適的質(zhì)粒DNA拷貝數(shù)。
由于本品檢測靈敏度極高,即使空氣中微量的DNA氣溶膠都可以引起污染,進而導致實驗失敗。因此反應體系配制時請于超凈工作臺內(nèi)進行,配制過程中請使用干凈**槍頭、反應管,條件容許的實驗室推薦使用專用的移液槍,避免交叉污染;
由于本品中含有熒光染料SYBRGreen I,因此無論保存還是配置反應體系時都應該盡量避免強光照射;
本產(chǎn)品中不含用以校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號誤差的Rox ReferenceDye,客戶可根據(jù)qPCR儀器技術(shù)指導決定是否需要加ROX內(nèi)參染料,用于消除信號本底以及校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號誤差;
建議在冰上配制PCR反應液,再放入PCR儀器中擴增??梢蕴岣邤U增特異性,減少背景;
模板DNA:用本產(chǎn)品,cDNA、基因組DNA、質(zhì)粒DNA、病毒DNA等都可作為模板。在添加DNA模板時請注意模板量對PCR擴增的影響。本產(chǎn)品建議添加量為:
cDNA添加量不應超過總反應體系的10%;基因組DNA為模板時,為避免在高濃度區(qū)域出現(xiàn)線性差的情況,請注意添加量小于500ng;病毒DNA也可作為PCR模板,添加時請以300ng為上限;由于質(zhì)粒DNA濃度和拷貝數(shù)很高,在添加PCR模板之前*好進行稀釋梯度試驗,以便確定合適的質(zhì)粒DNA拷貝數(shù)。
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