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PCR產(chǎn)物純化效率提升方法
日期：2024-11-22 09:23
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摘要：
PCR擴(kuò)增完成后需要進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，在條帶單一無(wú)其他雜帶的情況下，可以直接對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行純化。提升PCR產(chǎn)物純化效率提升方法如下：
1.模板純度，有較多蛋白或其他雜質(zhì)時(shí)，會(huì)一定程度影響pcr效率；
2.模板量，過(guò)高的模板量反而會(huì)降低pcr效率特異性；
3.引物，引物的長(zhǎng)度xu要再效率和特異性間獲得優(yōu)化，其次要控制引物gc含量；
4.聚合酶，要考慮酶的保真率和速度；
5.mg離子濃度，mg離子濃度過(guò)高會(huì)降低特異性，濃度過(guò)低會(huì)降低效率；
6.退火溫度：退火溫度低，效率會(huì)高，但特異性降低；退...
PCR擴(kuò)增完成后需要進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，在條帶單一無(wú)其他雜帶的情況下，可以直接對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行純化。提升PCR產(chǎn)物純化效率提升方法如下：
1.模板純度，有較多蛋白或其他雜質(zhì)時(shí)，會(huì)一定程度影響pcr效率；
2.模板量，過(guò)高的模板量反而會(huì)降低pcr效率特異性；
3.引物，引物的長(zhǎng)度xu要再效率和特異性間獲得優(yōu)化，其次要控制引物gc含量；
4.聚合酶，要考慮酶的保真率和速度；
5.mg離子濃度，mg離子濃度過(guò)高會(huì)降低特異性，濃度過(guò)低會(huì)降低效率；
6.退火溫度：退火溫度低，效率會(huì)高，但特異性降低；退火溫度高，效率降低，但特異性會(huì)提高，需優(yōu)化。