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PCR產(chǎn)物純化效率提升方法

日期:2024-11-22 09:23
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摘要: PCR擴(kuò)增完成后需要進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),在條帶單一無(wú)其他雜帶的情況下,可以直接對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行純化。提升PCR產(chǎn)物純化效率提升方法如下: 1.模板純度,有較多蛋白或其他雜質(zhì)時(shí),會(huì)一定程度影響pcr效率; 2.模板量,過(guò)高的模板量反而會(huì)降低pcr效率特異性; 3.引物,引物的長(zhǎng)度xu要再效率和特異性間獲得優(yōu)化,其次要控制引物gc含量; 4.聚合酶,要考慮酶的保真率和速度; 5.mg離子濃度,mg離子濃度過(guò)高會(huì)降低特異性,濃度過(guò)低會(huì)降低效率; 6.退火溫度:退火溫度低,效率會(huì)高,但特異性降低;退...

PCR擴(kuò)增完成后需要進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),在條帶單一無(wú)其他雜帶的情況下,可以直接對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行純化。提升PCR產(chǎn)物純化效率提升方法如下:

1.模板純度,有較多蛋白或其他雜質(zhì)時(shí),會(huì)一定程度影響pcr效率;

2.模板量,過(guò)高的模板量反而會(huì)降低pcr效率特異性;

3.引物,引物的長(zhǎng)度xu要再效率和特異性間獲得優(yōu)化,其次要控制引物gc含量;

4.聚合酶,要考慮酶的保真率和速度;

5.mg離子濃度,mg離子濃度過(guò)高會(huì)降低特異性,濃度過(guò)低會(huì)降低效率;

6.退火溫度:退火溫度低,效率會(huì)高,但特異性降低;退火溫度高,效率降低,但特異性會(huì)提高,需優(yōu)化。

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