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注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
50T柯薩奇病毒B4PCR檢測試劑盒 |
50T |
BH-P63384 |
它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
核黃素激酶(RFK)ELISA試劑盒 RFK ELISA Kit 活化半胱胺酸蛋白酶蛋白3抗體英文名稱:caspase-3 p12 subunit 0.1ml
和肽素(copeptin)ELISA試劑盒 copeptin ELISA Kit 7號染色體開放閱讀框61抗體英文名稱:C7ORF61 0.2ml
含球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶2(Tie-2)ELISA試劑盒 Tie-2 ELISA Kit 少突膠質(zhì)細(xì)胞跨膜蛋白抗體英文名稱:Claudin 11 0.1ml
含球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶1(Tie-1)ELISA試劑盒 Tie-1 ELISA Kit 刺激分子B7-1蛋白抗體英文名稱:CD80 0.1ml
含SET域4(setd4)ELISA試劑盒 setd4 ELISA Kit 末端補(bǔ)體復(fù)合物抗體英文名稱:C5b-9 0.2ml
含patatin樣磷脂酶域3(PNPLA3/ADPN/C22orf20)ELISA試劑盒 PNPLA3/ADPN/C22orf20 ELISA Kit 8號染色體開放閱讀框55抗體英文名稱:C8orf55 0.2ml
過氧化脂質(zhì)/乳過氧化物酶(LPO)ELISA試劑盒 LPO ELISA Kit 補(bǔ)體C4a+C4b蛋白抗體英文名稱:C4a+C4b 0.1ml
過氧化脂質(zhì)(LPO)ELISA試劑盒 LPO ELISA Kit CD44V7抗體英文名稱:CD44v7 0.1ml
過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISA試劑盒 PPAR-γ ELISA Kit CD44V10抗體英文名稱:CD44v10 0.1ml
過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA試劑盒 PPAR-α ELISA Kit CD44V4抗體英文名稱:CD44v4 0.1ml
過氧化物酶體增殖激活物受體γ輔激活因子1α(PPARGC1)ELISA試劑盒 PPARGC1 ELISA Kit 緊密連接蛋白4抗體英文名稱:Claudin 4 0.1ml
過氧化氫酶(CAT)ELISA試劑盒 CAT ELISA Kit 6號染色體開放閱讀框140抗體英文名稱:C6orf140 0.2ml
過敏/補(bǔ)體片斷4(C4a)ELISA試劑盒 C4a ELISA Kit L型鈣通道蛋白抗體英文名稱:CACH2 0.1ml
果糖胺(FRA)ELISA試劑盒 FRA ELISA Kit 緊密連接蛋白3抗體英文名稱:Claudin 3 0.1ml
果糖二磷酸醛縮酶A(ALDOA)ELISA試劑盒 ALDOA ELISA Kit 電壓依賴性鈣通道Cav3.1抗體英文名稱:CACNA1G 0.1ml
50T柯薩奇病毒B4PCR檢測試劑盒三七皂苷 S(95%) Notoginsenoside S 575446-95-6 10mg
人參皂苷Rg5 Ginsenoside Rg5 186763-78-0 10mg
人參皂苷Rk1 Ginsenoside RK1 494753-69-4 10mg
四氫姜黃素 Tetrahydrocucumin 36062-04-1 20mg
四氫胡椒堿 Tetrahydropiperine 23434-88-0 20mg
苦參醇 F Kushenol F 97938-30-2 10mg
桔梗皂苷D3 Platycodin D3 67884-03-1 5mg
去乙酰車葉草酸甲酯 Deacetyl asperulosidic acid methyl ester 52613-28-2 20mg
銀杏內(nèi)酯K(96%) Ginkgolide K 153355-70-5 20mg
常山乙素 Febrifugine 24159-07-7 10mg
石斛酚(95%) Dendrophenol 67884-30-4 10mg
去氧穿心蓮內(nèi)酯 Deoxyandrographolide 79233-15-1 10mg
地骨皮乙素 Kukoamine B 164991-67-7 10mg