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它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針?lè)晒舛?RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
50T豬肺炎支原體(MHP)PCR檢測(cè)試劑盒 |
50T |
BH-P63870 |
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
補(bǔ)體3a(C3a)ELISA試劑盒 C3a ELISA Kit 三磷酸肌苷焦磷酸酶抗體英文名稱:Inosine triphosphate pyrophosphatase 0.2ml
補(bǔ)體1抑制因子(C1INH)ELISA試劑盒 C1INH ELISA Kit 吲哚胺2,3-雙加氧酶抗體英文名稱:IDO 0.2ml
博來(lái)霉素水解酶(BLMH)ELISA試劑盒 BLMH ELISA Kit 白細(xì)胞介素19抗體英文名稱:IL-19 0.2ml
玻璃體蛋白(VIT)ELISA試劑盒 VIT ELISA Kit 抑制素A/Inhibin α抗體英文名稱:Inhibin Alpha 0.2ml
丙酮酸脫氫酶磷酸酶(PDP)ELISA試劑盒 PDP ELISA Kit 胰島素基因增強(qiáng)結(jié)合蛋白1/2抗體英文名稱:Islet-1+2 0.2ml
丙酮酸脫氫酶激酶同工酶4(PDK4)ELISA試劑盒 PDK4 ELISA Kit 磷酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體英文名稱:Phospho-IRAK1 (Ser376) 0.1ml
丙酮酸脫氫酶β(PDHβ)ELISA試劑盒 PDHβ ELISA Kit 磷酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體英文名稱:Phospho-IRAK1 (Thr209) 0.1ml
丙酮酸脫氫酶α(PDHα)ELISA試劑盒 PDHα ELISA Kit 磷酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體英文名稱:Phospho-IRAK1 (Thr387) 0.1ml
丙酮酸羧化酶(PC)ELISA試劑盒 PC ELISA Kit 干擾素調(diào)節(jié)因子3英文名稱:IRF3 0.1ml
丙糖磷酸異構(gòu)酶1(TPI1)ELISA試劑盒 TPI1 ELISA Kit 磷酸化干擾素調(diào)節(jié)因子3英文名稱:Phospho-IRF3 (Ser396) 0.1ml
丙氨酸氨肽酶(AAP)ELISA試劑盒 AAP ELISA Kit 干擾素調(diào)節(jié)因子7抗體英文名稱:IRF7 0.1ml
丙氨酸/絲氨酸/半胱氨酸/蘇氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(ASCT1)ELISA試劑盒 ASCT1 ELISA Kit 磷酸化干擾素調(diào)節(jié)因子7抗體英文名稱:Phospho-IRF7 (Ser471 + Ser472) 0.1ml
別孕烯醇酮(AP)ELISA試劑盒 AP ELISA Kit 磷酸化胰島素受體底物-1抗體英文名稱:phospho-IRS1(Ser302) 0.1ml
表皮調(diào)節(jié)素(EREG)ELISA試劑盒 EREG ELISA Kit 磷酸化胰島素受體底物-1抗體英文名稱:phospho-IRS1(Ser612) 0.1ml
表皮轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(TGM3)ELISA試劑盒 TGM3 ELISA Kit 磷酸化胰島素受體底物-1抗體英文名稱:phospho-IRS1(Ser332 + Ser336) 0.1ml
50T豬肺炎支原體(MHP)PCR檢測(cè)試劑盒2 ug pmCherry-GFP-LC3 pmCherry-GFP-LC3 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
2 ug pmCherry-LC3 pmCherry-LC3 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
2 ug pALEX c pALEX c 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
2 ug pMD18 pMD18 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
2 ug pMD18T-EGFP pMD18T-EGFP 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
2 ug pMD2G pMD2G 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
2 ug pMDL pMDL 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
2 ug pMDLg pRRE pMDLg pRRE 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
2 ug pMelBac B pMelBac B 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
2 ug pMEP4 pMEP4 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
2 ug pMET A pMET A 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
2 ug pMET B pMET B 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
2 ug pMET C pMET C 低溫運(yùn)輸,-20℃保存