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它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計,不會跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
50T百日咳桿菌(BP)PCR檢測試劑盒 |
50T |
BH-P64022 |
實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
注意事項:
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
蛋白磷酸酶γ1抗體英文名稱:PP1C gamma 0.1ml
核苷酸還原酶M2B抗體英文名稱:p53R2 0.1ml
磷酸二酯酶4A抗體英文名稱:PDE4A 0.1ml
絲束蛋白T Plastin抗體英文名稱:PLASTIN3 0.2ml
神經(jīng)叢蛋白A2抗體英文名稱:Plexin A2 0.1ml
網(wǎng)蛋白抗體英文名稱:Plectin 0.2ml
前列腺高表達蛋白1抗體英文名稱:PTOV1 0.2ml
磷酸化抑制基因P53抗體英文名稱:phospho-P53(Thr55) 0.1ml
嘌呤ATP受體抗體英文名稱:P2Y2 0.2ml
磷酸化絲裂原活化蛋白激酶p38抗體英文名稱:phospho-p38 MAPK (Thr180 + Tyr182) 0.1ml
果膠酶抑制蛋白18抗體英文名稱:Pectinesterase inhibitor 18 1ml
α型-過氧化酶活化增生受體抗體(PPAR α, PPAR-α)英文名稱:PPAR alpha 0.1ml
同源盒蛋白HOXB13抗體英文名稱:PSGD/HOXB13 0.2ml
磷酸化P63抑制基因抗體英文名稱:Phospho-p63 (Ser160+Ser162) 0.1ml
磷酸化3磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1抗體英文名稱:Phospho-PDPK1(Ser393) 0.1ml
50T百日咳桿菌(BP)PCR檢測試劑盒M-H瓊脂平板 用于藥敏試驗瓊脂稀釋法及擴散法。 90mmX20個
MRS培養(yǎng)基(莫匹羅星鋰鹽改良MRS培養(yǎng)基基礎(chǔ)) 用于乳酸的分離、計數(shù)和培養(yǎng),每100mL培養(yǎng)基添加1支配套試劑(SR0370),可單獨用于雙歧桿的分... 250g
MRS肉湯培養(yǎng)基 用于乳酸的培養(yǎng) 250g
MUGal(4-甲基傘形酮-β-半乳萄糖苷)肉湯 用于多管發(fā)酵法快速檢測大腸群 100g
MUG培養(yǎng)基 用于大腸埃希氏的快速測定,可觀察熒光和吲哚試驗。 5mlX20支
MUG營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 用于濾膜法測定生活飲用水及其水源水中的大腸埃希氏(GB/T5750.12-2006)。 100g
OF(Hugh-leifson) 生化鑒定 20支/盒
OXA瓊脂平板(牛津瓊脂平板) 用于李斯特氏的選擇性分離培養(yǎng)。(SN、美國FDA) 90mmX20個
PALCAM瓊脂凍干配套試劑 每支添加于100ml(026070)中配成PALCAM瓊脂。 10支
PALCAM瓊脂凍干配套試劑 每支添加于100ml(026070)中配成PALCAM瓊脂。 10支/盒
PALCAM瓊脂基礎(chǔ) 用于單增李斯特氏的選擇性分離培養(yǎng)(GB 4789.30-2010和SN/T0184-2005)。 250g
PALCAM瓊脂平板 用于李斯特氏的選擇性分離培養(yǎng)。(GB、SN、美國FDA) 90mmX20個
Pfizer 選擇性腸球瓊脂培養(yǎng)基 用于多管發(fā)酵法測定水中腸球的確證試驗(CJ/T148-2001和SN/T2206.5-2009)。 100g